一種抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑及應用的制作方法

一種抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑及應用的制作方法
【專利摘要】本發明屬中藥領域，涉及一種抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑及應用，尤其涉及一種由梔子苷和綠原酸組成的中藥有效成分復方制劑及其用途。本發明的復方制劑由梔子苷和綠原酸2種成分組成。本復方制劑可按常規方法制成臨床常用制劑，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑等口服固體制劑。動物實驗表明，本復方制劑可顯著降低模型大鼠肝組織甘油三酯含量，減輕肝脂肪變性程度和肝損傷程度，所述效果優于各自單用的效果，本復方制劑可提高抗非酒精性脂肪肝的作用，能有效阻止的非酒精性脂肪肝發展，可用于治療和預防非酒精性脂肪性肝病、慢性肝損傷等病癥。
【專利說明】一種抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑及應用
【技術領域】
[0001]本發明屬中藥領域，涉及提高抗非酒精性脂肪性肝病作用的藥物，具體涉及一種抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方及應用，尤其涉及一種由桅子苷和綠原酸組成的中藥有效成分復方及其在治療慢性肝病藥物中的用途。
【背景技術】
[0002]現有技術公開了有關非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是遺傳一環境一代謝應激相關性肝病，包括單純性脂肪肝(NAFL)及由其演變的脂肪性肝炎(NASH)和肝硬化。據報道，目前，NAFLD的患病率在西方發達國家為30%左右；在我國，由于生活習慣與飲食結構的改變，近年來發病率呈上升趨勢。據上海市3175例成人調查發現，脂肪肝患病率為17.3%，其中非酒精性脂肪性肝病患病率達15.4% ;另據報道，17%的NAFL在5~10年發生NASH，后者10~15年內肝硬化發生率為15%~25%。因所述非酒精性脂肪性肝病具有高患病率、低齡化發病趨勢、慢性進展經過、和對心血管事件發生的影響等特點，其臨床重要性日漸凸顯，因此，積極防治非酒精性脂肪性肝病具有重要的社會和經濟意義。
[0003]所述NAFLD的致病因素復雜，其發病機理尚未明了，目前認為主要相關因素包括營養因素(如肥胖癥)，內分泌代謝因素(如糖尿病、高脂血癥)，遺傳因素，精神、心理社會環境因素等。其中:(1)脂肪代謝異常:如肝合成游離脂肪酸(FFA)增加或碳水化合物合成甘油三脂(TG)增加、游 離脂肪酸輸送入肝增多、脂肪酸在線粒體β氧化減少、極低密度脂蛋白(VLDL)合成和分泌減少，致TG轉運障礙等；(2)激素影響:如胰島素抵抗(IR)在脂肪肝形成中起重要作用；(3)氧應激及脂質過氧化損傷；(4) FFA的作用；(5)其他如遺傳因素、免疫反應、肝篩改變、缺氧和微循環障礙等等。
[0004]目前NAFLD的防治尚缺乏理想的治療藥物。以往，脂肪肝尚被認為是不需特殊治療的疾病；目前臨床上，特別是對肥胖及營養過剩的脂肪肝，以生活方式干預獲得體重減輕及低熱量飲食則成為NAFLD的基本治療措施，但減重效應在臨床實際中并不容易得到重復，因此開發獨立于減重的藥物治療仍十分關鍵。
[0005]研究還顯示，NAFLD最常見的相關因素是肥胖、血脂紊亂和糖尿病，該因素與高血壓、動脈粥樣硬化、冠心病等均屬于代謝綜合征的范疇，其“共同土壤”是胰島素抵抗及其繼發的糖、脂代謝紊亂；因此，NAFLD被認為是一復雜的、系統性的代謝性疾病，其治療靶點尚未清晰，也正是現代醫學目前仍缺乏理想治療藥物的原因之一。研究者認為，對于復雜性病變，需要探求綜合治療的方法，鑒于NAFLD的上述病理機制特點，以及中醫藥整體觀指導的陰陽平衡理論與中藥復方多途徑藥理作用特點，中醫藥勢必將對該復雜性代謝性疾病的治療中體現出其特點和優勢，或可成為闡發中醫藥臨床優勢的一個優勢病種和一個良好切入點。
[0006]近年來，國內外開展了一些抗非酒精性脂肪肝中藥有效組分或成分的研究，并發現了一些有抗非酒精性脂肪肝效應的中藥有效組分或成分。然而，無論傳統中藥復方還是單一的有效成分，皆有其不足之處。傳統中藥復方由于成分復雜，難以明了其所含成分，使其制劑存在一定的可控性、穩定性的困擾，這也是中醫藥國際化的難題之一；而單一組分或成分可能失去中醫整體觀治療復雜疾病的特色優勢；因此如何對傳統復方“去粗取精”而又保持中醫復方配伍治療復雜疾病的優勢，是一大難題，也是中醫藥抗非酒精性脂肪肝藥物研究的突破方向之一。
[0007]本申請的發明人基于長期以來研究實踐，擬提供有顯著的抑制肝脂肪沉積和抗肝損傷作用中藥復方制劑，尤其是抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑。

【發明內容】

[0008]本發明的目的是提供一種抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑，具體涉及一種由桅子苷和綠原酸組成的中藥有效成分復方制劑；該復方復方制劑能提高抗非酒精性脂肪肝、抗肝損傷作用。
[0009]本發明根據非酒精性脂肪性肝病(NAFLD “痰濕、血瘀”的基本病機特點，以“祛濕化瘀”為主要治法，確立中藥復方“祛濕化瘀方”加減治療NAFLD患者，臨床取得良好的效
果O
[0010]本發明在研究證實“祛濕化瘀方”可有效防治NAFLD的基礎上，以祛濕化瘀方中5種已被認知的、能被分離提取或購買的有效組分或單體(綠原酸、桅子苷、姜黃素、虎杖苷、白術多糖)為研究對象獲得中藥有效組分配方BZL方(申請號:201110056269);在上述BZL方研究基礎上，運用數學統計模型，對該BZL方進行反復處方篩選、優化和藥效驗證實驗，篩選出有桅子苷和綠原酸組成的中藥有效成分復方(命名為ZL方)，經試驗表明，其抗NAFLD和肝損傷作用顯著；大鼠NAFLD模型證實其降低肝組織甘油三酯及降低血清ALT療效有優于“BZL方”的優勢；小鼠NAFLD模型實驗證實其降低肝組織甘油三酯及減輕肝脂肪變性程度和肝損傷療效顯著優于“`BZL方”或單用桅子苷、綠原酸或羅格列酮。
[0011]具體而言，本發明的抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑，其特征在于，由桅子苷和綠原酸2種成分組成，所述的桅子苷、綠原酸的重量比為67.2:10~67.2:0.2，
[0012]本發明所述的中藥有效成分中，
[0013]桅子苷(Geniposide)來源于桅子，可通過常規提取方法或商業采購獲得；
[0014]綠原酸(Chlorogenic acid)來源于中藥茵陳,可通過常規提取方法或商業采購獲得。
[0015]本發明所述復方制劑，經高脂飲食誘導的大鼠非酒精性脂肪肝模型，運用“均勻設計”篩選，并經高脂飲食誘導的大鼠和C57小鼠非酒精性脂肪肝兩種動物模型(模型形成后治療性給藥或模型發展過程中介入干預)反復驗證；結果表明，本發明所述復方制劑能顯著降低模型大鼠或小鼠肝組織甘油三酯(TG)含量，減輕肝脂肪變性程度和肝損傷程度，上述作用顯著優于各自單用的效果；本復方制劑中的2種組分配伍應用可提高抗NAFLD的作用，能有效阻止非酒精性脂肪肝的發展并促進脂肪肝的逆轉，可用于治療和預防非酒精性脂肪性肝病、各種慢性肝損傷等病癥。
[0016]本發明所述的中藥有效成分復方制劑的有效組分或成分組合可進一步用于制備治療慢性肝病藥物，及用于制備治療非酒精性肝病的藥物和用于制備防治肝損傷的藥物。[0017]本發明中，所述的由桅子苷和綠原酸組成的復方，可按常規方法制成臨床常用制劑，所述制劑的劑型，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑等口服固體制劑。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1顯示了 SD大鼠肝組織病理觀察結果(HE染色X200)，其中，1:正常組，2:模型組，3:ZL方組，4:BZL方組，5:祛濕化瘀方組，6:羅格列酮組。
[0019]圖2顯示了 SD大鼠肝組織病理觀察結果(HE染色X200)，其中，1:正常組，2:模型組，3:ZL方組，4:BZL方組，5:祛濕化瘀方組，6:羅格列酮組。
[0020]圖3顯示了 C57小鼠肝組織病理觀察結果(HE染色X 200)，其中，1:正常組，2:模型組,3:ZL方組，4:桅子苷組，5:綠原酸組，6:BZL方組，7:祛濕化瘀方組，8:羅格列酮組。
[0021]圖4顯示了 C57小鼠肝組織病理觀察結果(油紅O染色X200)，其中，1:正常組，2:模型組，3:ZL方組，4:桅子苷組，5:綠原酸組，6:BZL方組，7:祛濕化瘀方組，8:羅格列酮組。
【具體實施方式】
[0022]本發明的復方有益效果通過下述實驗證實。
[0023]實施例1
[0024]按重量比為67.2:10~67. 2:0.2取中藥有效成分桅子苷和綠原酸，按常規方法制備抗非酒精性脂肪性肝病的復方制劑，所述的中藥有效成分中，桅子苷(Geniposide)來源于桅子，可通過常規提取方法或商業采購獲得；綠原酸(Chlorogenic acid)來源于中藥茵陳，可通過常規提取方法或商業采購獲得。
[0025]更具體的，本發明的復方制劑可按常規方法制成臨床常用制劑，所述劑型包括顆粒劑、片劑、膠囊劑等口服固體制劑。
[0026]實施例2
[0027]用高脂飲食誘導的大鼠非酒精性脂肪肝模型和均勻設計方法回歸分析獲得相應最佳的降低肝臟甘油三酯含量作用的配方
[0028]1、材料
[0029](I)動物:wistar雄性大鼠，清潔級，體重(160±10)g，由中科院上海實驗動物中心提供；
[0030]SD雄性大鼠53只，體重150± 10g，清潔級，購自中科院上海實驗動物中心；
[0031](2)主要試劑及藥物:虎杖苷(Polydatin)來源于虎杖，批號:RE090703，綠原酸(Chlorogenic acid)來源于茵陳，批號:GY0900705,桅子苷(Geniposide)來源于桅子，批號:CY101018，姜黃素(curcumin)來源于姜黃，批號:CU090912,白術多糖(RhizomaAtractylodis Macrocephalae)來源于白術,批號:GY090510,以上藥物均購于西安冠宇生物技術有限公司。祛濕化瘀方中飲片茵陳、虎杖、姜黃、生桅子、白術均購于華宇中藥飲片有限公司。高脂飲食飼料(10%豬油+2%膽固醇+ 88%基礎飼料)，飼料購自上海斯萊克實驗動物有限公司，甘油三酯檢測試劑盒購自浙江東歐生物有限公司。
[0032]2、方法
[0033](I)均勻設計藥物篩選實驗:雄性SD大鼠58只，給予高脂飲食飼料飼養8周，設正常組、模型組、均勻設計配方十組，共13組；在造模第4周開始隨機分為模型組及藥物組，并灌胃給藥或飲用水繼續造模至第八周；各用藥組按均勻設計表配伍用藥，各組藥物均配制成相應濃度以10ml/kg大鼠體重進行灌胃給藥，治療4周后，以2%戊巴比妥鈉按2ml -Kg^1劑量腹腔注射麻醉，下腔靜脈采血，離心分離血清，取肝組織備檢；
[0034](2)均勻設計實驗方案:根據均勻設計方案選用Ull (111°)表(如表1所示)，以方中五味中藥有效組分作為考察因子，以X1、X2、X3、X4、X5分別代表方中的五味中藥有效組分，每個因子分別取5個水平(即呈梯度遞增的5種不同劑量)，2次重復(如表4所示)；先根據國家藥典確定祛濕化瘀復方各藥物(茵陳、虎杖、白術、桅子、姜黃)劑量范圍，再根據每個有效成分的得率換算確定各組有效成分的劑量(如表6所示);X1 (綠原酸)的5個水平在
0.67-3.33mg/kg之間，X2 (虎杖苷)的5個水平在l_5mg/kg之間，X3 (白術多糖)的5個水平在53.33 - 266.67mg/kg之間，X4 (桅子苷)的5個水平在9_45mg/kg之間，X5 (姜黃素)的5個水平在5.5-27.5mg/kg的劑量范圍內；按照均勻設計表格安排各因子及水平，進行組方設計，共10組；
[0035](3 )篩選指標:肝組織TG含量；
[0036](4)統計方法數據均采用SPSS 12.0軟件包進行統計分析。均勻設計實驗采用逐步回歸分析(以P = 0.05作為顯著水準進行統計檢驗)。
[0037]3、均勻設計藥物篩選實驗結果:
[0038]肝組織TG含量檢測顯示，模型組達76.57 ± 31.00mg/g,其均值達正常組(13.68±4.27mg/g)的5.59倍，兩者有顯著統計學差異。提示本次模型制備很成功，即均勻設計試驗的實驗模型基礎良好。在非酒精性脂肪肝模型成功基礎上，檢測肝組織TG含量，并進行逐步回歸分析(如表1所示)，得回歸方程回歸方程:y =71.966-19.798x4+18.687x1x4，即當綠原酸(Xl) 0.067mg,桅子苷(X4) 4.5mg (劑量為每100g大鼠每天給藥量)時對肝組織TG含量抑制作用最佳；結合本實施例設計及臨床常用劑量，桅子苷與綠原酸按照67.2:1質量`比組合為有效成分復方，命名為“ZL方”。
[0039]肝組織甘油三酯含量及多元統計回歸分析結果:
[0040]表1是各組大鼠肝組織TG含量(X 士S) 0
[0041]表1
[0042]
【權利要求】
1.一種抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑，其特征在于，由中藥有效成分桅子苷和綠原酸2種成分組成，所述的桅子苷、綠原酸的重量比為67.2:10~67.2:0.2。
2.按權利要求1所述的抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑，其特征在于，所述的中藥有效成分為有效組分或成分組合。
3.權利要求1所述的抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑在制備治療慢性肝病藥物中的用途。
4.權利要求1所述的抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑在制備治療非酒精性肝病的藥物中的用途。
5.權利要求1所述的抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑在制備防治肝損傷的藥物中 的用途。
6.按權利要求1~4任一所述的抗非酒精性脂肪性肝病的中藥有效成分復方制劑，其特征在于，所述制劑的劑型為顆粒劑、片劑或膠囊劑。
【文檔編號】A61P1/16GK103800352SQ201210451879
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月12日 優先權日:2012年11月12日
【發明者】胡義揚, 馮琴, 彭景華, 唐亞軍, 孟勝喜, 劉平 申請人:上海中醫藥大學附屬曙光醫院