本發明屬于生物醫藥，具體涉及一種宮頸癌診斷用試劑盒及其應用。
背景技術：
1、宮頸癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率在我國特有的惡性腫瘤中排第二，僅次于乳腺癌。高危型人乳頭瘤病毒hpv的持續感染是宮頸癌主要的致病因素，盡管hpv感染大多可被免疫系統清除，但是持續感染可能導致宮頸上皮內瘤變，進而發展為宮頸癌。
2、目前，宮頸癌標準的治療方法主要包括手術切除、放/化療，然而，他們有顯著的副作用。此外，轉移、復發的宮頸癌很難達到徹底根治，也是患者死亡的主要危險因素。大多數宮頸癌早期患者可以成功治愈，但是宮頸癌患者在晚期診斷存活率僅有15%，因此，早期檢測和治療可以顯著降低宮頸癌患者的死亡率，對宮頸癌早期檢測已經成為臨床研究的熱點之一。
3、目前，宮頸癌的早期篩查主要包括以下方法：1)細胞學檢查：觀察宮頸脫落細胞的形態學變化，但是主觀性強，易漏診；2)hpv?dna檢查：檢測高危型hpv核酸，靈敏度高，但是特異性低，易導致過度治療；3)甲基化檢查：檢測基因甲基化，客觀性強，但是尚未大規模普及；4)蛋白質標志物檢查：宮頸癌常見的生物標志物有scc，ca12-5，尿促性素片段，其中ca12-5是目前臨床上使用最廣泛的生物標志物，但它特異性不高，不能完全解決問題。在對宮頸癌臨床早期診斷治療中，最關鍵的問題是在疾病的早期缺乏敏感的蛋白標志物對腫瘤的發生進行識別。
4、基于上述目的，本發明提供了一種宮頸癌診斷用試劑盒及其應用。
技術實現思路
1、本發明的第一目的在于提供一種宮頸癌診斷用試劑盒。
2、本發明的第二目的在于提供一種宮頸癌診斷用試劑盒的應用。
3、為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：
4、一種宮頸癌診斷用試劑盒，所述試劑盒包括包被捕獲抗體e3g-1的酶標板、hrp標記抗體k6t-2工作液、抗原標準品、洗滌液、顯色液以及終止液；
5、所述捕獲抗體e3g-1為抗bend3蛋白的單克隆抗體e3g-1，其重鏈氨基酸序列如seqid?no.1所示，輕鏈氨基酸序列如seq?id?no.2所示；所述hrp標記抗體k6t-2為抗bend3蛋白的單克隆抗體k6t-2，其重鏈氨基酸序列如seq?id?no.3所示，輕鏈氨基酸序列如seq?idno.4所示。
6、進一步地，所述bend3蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.5所示。
7、進一步地，所述抗bend3蛋白的單克隆抗體的制備過程如下：
8、（1）取重組bend3蛋白作為抗原免疫小鼠，將免疫小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞；
9、（2）elisa篩選雜交瘤細胞，將陽性細胞系進行亞克隆及擴大培養，然后接種于小鼠體內，收集腹水并純化，得到抗bend3蛋白的單克隆抗體。
10、進一步地，所述抗原標準品為重組bend3蛋白抗原；所述洗滌液為pbst；所述顯色液為tmb；所述終止液為硫酸。
11、進一步地，所述顯色液濃度為2mg/l-4mg/l；所述終止液濃度為2m-3m。
12、進一步地，所述試劑盒的檢測方法為：
13、（1）取出包被捕獲抗體e3g-1的酶標板，使用洗滌液洗板，加入待檢測樣本以及梯度稀釋好的抗原標準品，室溫孵育1-3h后，洗滌液洗滌并甩干；
14、（2）將hrp標記抗體k6t-2工作液加入到步驟（1）的體系中，室溫孵育1-3h后，洗滌液洗滌并甩干；
15、（3）向步驟（2）反應后的體系中加入顯色液，室溫避光顯色5-10min；
16、（4）向步驟（3）反應后的體系中加入終止液終止反應；
17、（5）使用酶標儀測定450?nm波長下od值，根據標準曲線計算結果。
18、根據以上所述的一種宮頸癌診斷用試劑盒的應用，用于檢測血清中bend3蛋白含量。
19、與現有技術相比，本發明的有益效果主要在于：
20、本發明提供了一種宮頸癌診斷用試劑盒，可特異性檢測血清中的?bend3蛋白含量，作為高表達?bend3蛋白類的宮頸癌輔助檢測手段，特異性強，且穩定性良好，極大地提高了宮頸癌的診斷效率，具有廣闊的應用前景。
1.一種宮頸癌診斷用試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括包被捕獲抗體e3g-1的酶標板、hrp標記抗體k6t-2工作液、抗原標準品、洗滌液、顯色液以及終止液；
2.根據權利要求1所述的宮頸癌診斷用試劑盒，其特征在于，所述bend3蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.5所示。
3.根據權利要求1所述的一種宮頸癌診斷用試劑盒，其特征在于，所述抗bend3蛋白的單克隆抗體的制備過程如下：
4.根據權利要求1所述的一種宮頸癌診斷用試劑盒，其特征在于，所述抗原標準品為重組bend3蛋白抗原；所述洗滌液為pbst；所述顯色液為tmb；所述終止液為硫酸。
5.根據權利要求4所述的一種宮頸癌診斷用試劑盒，其特征在于，所述顯色液濃度為2mg/l-4mg/l；所述終止液濃度為2m-3m。
6.根據權利要求1所述的一種宮頸癌診斷用試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的檢測方法為：
7.根據權利要求1-6任一項所述的一種宮頸癌診斷用試劑盒的應用，其特征在于，用于檢測血清中bend3蛋白含量。