1.本發(fā)明涉及用于在含水載體中復溶(reconstitution)的凍干藥物組合物，其包含脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a(csa)和至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖。
2.本發(fā)明還涉及通過復溶凍干的藥物組合物制備的液體藥物制劑，所述凍干的藥物組合物包含脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a作為活性劑以及特別適合于肺部應用的物質(zhì)。本發(fā)明的其他方面涉及用于制備此類組合物的方法以及包含所述組合物的試劑盒。此外，本發(fā)明涉及所述組合物的藥物用途及其在治療特定疾病例如肺部疾病中的應用。
背景技術(shù)：
3.環(huán)孢素(或與本文中的“環(huán)孢霉素”同義)是具有免疫抑制和鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制活性的環(huán)狀寡肽。它的特征在于免疫抑制的選擇性和可逆機制，其通過產(chǎn)生某些參與調(diào)節(jié)這些t細胞的細胞因子來阻斷t淋巴細胞的活化。這尤其涉及抑制白介素2的合成，而白介素
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2的合成同時抑制細胞毒性t淋巴細胞的增殖，所述細胞毒性t淋巴細胞的增殖例如是引起無關(guān)組織排斥反應的原因。環(huán)孢素通過與所謂的親環(huán)素(cyclophilines)或免疫親和素(immunophphilines)結(jié)合而在細胞內(nèi)發(fā)揮作用，后者屬于高親和力結(jié)合環(huán)孢素的蛋白質(zhì)家族。環(huán)孢素和親環(huán)素的復合物隨后阻斷了絲氨酸
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蘇氨酸磷酸酶
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鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶。其活性狀態(tài)繼而控制轉(zhuǎn)錄因子(例如nf
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kappab或nfatp/c)的激活，它們在激活各種細胞因子基因(包括白介素2)中起決定性作用。由于不再能產(chǎn)生細胞分裂所必需的蛋白質(zhì)，例如白介素
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2，因此在細胞周期的go或g1期導致免疫活性淋巴細胞的停滯。增加引起排斥反應的細胞毒性t細胞活性的t輔助細胞是環(huán)孢素的優(yōu)選攻擊部位。此外，環(huán)孢素抑制進一步的淋巴因子的合成和釋放，這些淋巴因子負責成熟的細胞毒性t淋巴細胞的增殖以及淋巴細胞的其他功能。環(huán)孢素阻斷白介素2的能力對其臨床療效至關(guān)重要：耐受性好的移植受者的特征是白介素2的產(chǎn)量低。相反，具有明顯排斥反應的患者未顯示對白介素2生產(chǎn)的抑制作用。
4.迄今為止(1980年代)投放市場的第一個也是唯一的環(huán)孢素是環(huán)孢素a(csa)。csa在化學上定義為環(huán)
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纈氨酰基]。它的可用性開創(chuàng)了移植醫(yī)學的新紀元，因為在它的幫助下，可以長期保持功能正常的移植器官的比例可以大大增加。第一種環(huán)孢素藥物(sandoz的)已經(jīng)可以將腎臟移植的成功率提高約2倍。自1990年代以來，具有更高和更可靠的生物利用度的新的環(huán)孢素口服制劑(sandoz(后來的諾華公司)的neoral)可以更好地進行給藥，并進一步提高成功率。盡管活性劑有了一些新的發(fā)展，但是csa仍然是移植醫(yī)學中經(jīng)常使用的藥物。
[0005]
如今，原則上，如果用csa治療患者，也可以成功進行肺移植。自從將這種活性劑引入臨床治療以來，全世界范圍內(nèi)進行的肺移植數(shù)量急劇增加。對于單個肺的移植以及兩個肺的移植都是如此。對于患有最后階段的肺部疾病的患者，通常考慮進行肺移植，在這種情況下，藥物治療失敗并且由于該疾病而導致預期壽命短。例如，在某些形式的肺氣腫和纖維
化(例如特發(fā)性肺纖維化)的情況下，建議單肺移植。囊性纖維化(粘液粘稠病(mucoviscidosis))，原發(fā)性肺動脈高壓，肺氣腫伴全身功能不全，頻繁的嚴重感染以及特發(fā)性肺纖維化伴有反復感染的并發(fā)癥，均需移植雙肺。在成功進行肺移植的情況下，患者的生活質(zhì)量可以再次提高到幾乎正常的水平。但是，與心臟、腎臟和肝臟移植相反，肺移植后的存活時間仍然相對較短，平均僅為5年。除其他因素外，這可能是由于以下事實：由于全身性副作用而不能對所有患者有效地給予活性劑環(huán)孢素，全身性副作用為例如腎功能不全，肌酐和尿素的血清水平升高，伴有結(jié)構(gòu)改變的腎損害，例如，間質(zhì)纖維化，血清膽紅素和肝酶水平升高，多毛癥，震顫，疲勞，頭痛，肥大性齦炎，胃腸道不適(如厭食癥，腹痛，惡心，嘔吐，腹瀉，胃炎，胃腸炎)，感覺異常，手腳刺痛感，動脈高血壓，血脂水平升高，痤瘡，皮疹，過敏性皮膚反應，高血糖癥，貧血，高尿酸血癥，痛風，體重增加，水腫，胃潰瘍，抽搐，月經(jīng)失調(diào)，高鉀血癥，低鎂血癥，潮熱，紅斑，瘙癢，肌痛性痙攣，肌肉疼痛，肌病等。
[0006]
因此，如果例如在肺移植后或在某些其他適應癥的情況下，可取的是以靶向和組織特異性的方式施用csa，從而僅實現(xiàn)活性劑的低全身生物利用度，以最小化活性劑對健康組織的影響。
[0007]
合適的劑型也可用于治療和預防疾病，例如哮喘，特發(fā)性肺纖維化，結(jié)節(jié)病，肺泡炎和肺實質(zhì)疾病(參見：drugs for the treatment of respiratory diseases,domenico spina,clive p.page等人編輯，劍橋大學出版社，2003，isbn 0521773210)。新的治療方面也導致以下的治療：可能的自身免疫(包括諸如神經(jīng)性皮炎，牛皮癬，非特異性濕疹，皮膚增生或突變之類的疾病)的局部治療，以及皮膚移植后的治療。眼科領(lǐng)域中的一個有趣的應用領(lǐng)域是，例如，用于角膜移植后的角膜結(jié)膜炎或其他傳染性眼病的治療，這些疾病對抗炎療法(例如類固醇抗炎療法)的反應不足。它也可用于治療動物如狗的角膜炎。
[0008]
已經(jīng)嘗試以例如1％和2％的油性滴眼劑形式(根據(jù)德國藥典使用精制花生油作為增溶劑的制劑)或者作為氣溶膠局部施用環(huán)孢素。然而，該方法通常失敗，主要是由于活性劑的非常低的水溶性，這使得有效施用相當困難。因此，在肺部應用的情況下，由于缺乏耐受性而不能使用某些可用于口服的增溶輔助劑。例如，含有環(huán)孢素a的optoral膠囊(novartis)包含含有乙醇、丙二醇和大量表面活性劑的微乳液濃縮物，因此構(gòu)成一種制劑，如果吸入，將引起嚴重的毒性作用。同樣，可用于輸注的輸注濃縮液(novartis)也不可吸入：其中所含的唯一輔助劑(adjuvant)是乙醇和聚(氧乙烯)
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40
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蓖麻油。它只能用于輸注，因為它事先已用0.9％的氯化鈉溶液或5％的葡萄糖溶液以1:20至1：100的比例稀釋。這導致可以通過輸注而不是通過吸入給藥的大體積。
[0009]
wo 86/03938描述了一種用于保存含有生物活性分子的脂質(zhì)體的方法，使得當重新水合時，脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)基本上保留了最初包封的所有材料。具有至少兩個單糖單元的防腐劑，例如海藻糖，可在內(nèi)部或外部使用，或在兩者上使用。
[0010]
wo 90/00389描述了具有兩親性脂質(zhì)和環(huán)孢素或其衍生物的冷凍干燥的潛在脂質(zhì)體混合物，用于脂質(zhì)體遞送環(huán)孢素到細胞中。凍干的潛在脂質(zhì)體混合物可包含各種糖，例如蔗糖、海藻糖和葡萄糖，以賦予冷凍保護作用并增強脂質(zhì)體的長期穩(wěn)定性。當在含水介質(zhì)中復溶以產(chǎn)生脂質(zhì)體時，基本上所有存在于冷凍干燥混合物中的環(huán)孢素都被包封在脂質(zhì)體中。該文獻進一步公開了包含兩親脂質(zhì)和環(huán)孢素或其衍生物的凍干脂質(zhì)體混合物，所述混合物基本上不含糖并且可以儲存至少120天，并且其中當在所述儲存之后制備含水脂質(zhì)體
制劑時，在所述混合物中的至少90％的所述環(huán)孢素被包封在具有基本均勻粒度分布的脂質(zhì)體中。
[0011]
wo 92/18104公開了一種制備脂質(zhì)體環(huán)孢素治療劑的方法，其特征在于將中性磷脂、選自磷脂酰甘油和二肉豆蔻酰磷脂酸的帶負電荷的磷脂和環(huán)孢素溶解在有機溶劑中形成溶液；干燥溶液以形成固相；用水溶液水合固相以形成脂質(zhì)體環(huán)孢素治療劑。該文獻進一步描述了懸浮在水溶液中的脂質(zhì)體，其特征在于包含中性磷脂、選自磷脂酰甘油和二肉豆蔻酰磷脂酸的帶負電荷的磷脂以及環(huán)孢素。
[0012]
wo 96/40064公開了脂質(zhì)體包封的環(huán)孢素制劑，其有效用作免疫抑制劑并用于治療抗藥性癌癥。所述制劑包括脂質(zhì)體，其由磷脂酰膽堿、膽固醇、磷脂酰甘油和環(huán)孢素組成，例如由磷脂酰膽堿、膽固醇、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油和環(huán)孢素組成。脂質(zhì)體被描述為單層的并且具有小于75納米的尺寸，并且在哺乳動物全血中是穩(wěn)定的。
[0013]
wo 98/00111提出了用于吸入的環(huán)孢素a的脂質(zhì)體分散體，其具有最高225mg/ml的非常高的磷脂濃度。但是，它具有很高的動態(tài)粘度，因此不能有效地霧化。從us 2003/0215494還已知環(huán)孢素a的脂質(zhì)體制劑。然而，其中描述的本發(fā)明在于以下事實：該制劑用于抑制肺轉(zhuǎn)移瘤。美國專利5,958,378描述了用于霧化的脂質(zhì)體環(huán)孢素制劑；但是，其粘度太高，以至于不能用電子振動膜霧化器霧化。此外，有機溶劑丁醇被用于該制劑的制備，但是盡管進行了隨后的凍干過程，但仍不能完全去除，并且產(chǎn)生的脂質(zhì)體大于1μm，其不能通過過濾滅菌并且僅具有低的滲透上皮細胞膜的能力。
[0014]
wo 98/36736描述了包含海藻糖和脂類脂質(zhì)體的凍干組合物，其中已摻入了生物活性成分，其特征在于該生物活性成分高度不溶于水，海藻糖/脂類的重量比小于或等于1.5，并且將所有海藻糖加入凍干前已經(jīng)形成的脂質(zhì)體的外部。
[0015]
wo 03/099362 a1描述了一種抑制個體中肺轉(zhuǎn)移瘤生長的方法，該方法包括以下步驟：施用一定劑量的脂質(zhì)
?
藥物增強劑脂質(zhì)體復合物；依次施用一定劑量的脂質(zhì)
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抗癌藥物脂質(zhì)體復合物，所述兩種脂質(zhì)體復合物均通過霧化從霧化器遞送；從而所述藥物增強劑和所述抗癌藥抑制個體中肺轉(zhuǎn)移瘤的生長，其中所述藥物增強劑可以選自環(huán)孢素a，環(huán)孢素d，維拉帕米，酮康唑，pcs 833，紅霉素，硝苯地平，雷帕霉素或20米貝地爾，其中抗癌藥物可以選自紫杉醇，多柔比星，依托泊苷，長春堿，喜樹堿，順鉑，卡鉑，柔紅霉素或阿霉素。
[0016]
wo 2007/065588 a1公開了液體藥物組合物，其包含治療有效劑量的環(huán)孢素；含水載體液體；選自磷脂類的第一增溶物質(zhì)；和選自非離子表面活性劑的第二增溶物質(zhì)。所公開的組合物適合于口服，腸胃外施用，經(jīng)鼻施用，粘膜施用，局部施用，特別是以氣溶膠形式肺部施用。
[0017]
wo 2016/146645a1公開了脂質(zhì)體環(huán)孢素制劑，其優(yōu)選包含單層脂質(zhì)體。脂質(zhì)體優(yōu)選具有使用光子相關(guān)光譜法測量作為z
?
平均值的至多約100nm的平均直徑和由光子相關(guān)光譜法測量的至多約0.5的多分散指數(shù)。
[0018]
該制劑可以固體制劑形式存在，用于在吸入前立即用含水溶劑復溶。固體制劑可以通過適合于從液體制劑中除去該溶劑的任何方法來制備。制備這種固體制劑的方法的優(yōu)選實例是冷凍干燥和噴霧干燥。為了在干燥過程中保護活性成分，可以摻入凍干保護劑和/或填充劑(bulking agent)，例如糖或糖醇，特別是蔗糖，果糖，葡萄糖，海藻糖，甘露醇，山梨糖醇，異麥芽酮糖醇或木糖醇。然而，最值得注意的是，將糖添加到包含脂質(zhì)體包封的csa
的預制制劑中。
[0019]
因此，本發(fā)明的一個目的是提供包含脂質(zhì)體溶解形式的csa的改進的藥物制劑，其允許csa的肺部給藥，優(yōu)選通過吸入進行csa的肺部給藥，其易于從容易獲得的起始原料和容易獲得的技術(shù)制備。此外，與液體制劑相比，包含脂質(zhì)體溶解形式的csa的藥物制劑應允許增強制劑(更具體地講，該制劑所包含的脂質(zhì)體)的穩(wěn)定性，從而允許更長的貯存時間并降低對溫度或其他貯存條件的敏感性。此外，包含脂質(zhì)體溶解形式的csa的改進的藥物制劑，特別是當以固體形式提供時，應允許容易且快速地復溶并保留所包含的脂質(zhì)體的物理特性。根據(jù)包括實施例和權(quán)利要求的本公開內(nèi)容，本發(fā)明的目的將變得顯而易見。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
[0020]
在第一方面，本發(fā)明涉及用于在含水載體液體中復溶的凍干藥物組合物，其包括：a)脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)，其包括i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；和b)至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，其中所述至少一種二糖存在的量是所述凍干組合物的總重量的至少40wt％。
[0021]
在第二方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物，其用作肺部應用的藥物。
[0022]
在第三方面，本發(fā)明涉及用于制備用于吸入的脂質(zhì)體水分散體的試劑盒，脂質(zhì)體水分散體包含治療有效量的呈脂質(zhì)體溶解(摻入/嵌入(intercalated))形式的環(huán)孢素a，試劑盒包括：根據(jù)本發(fā)明的第一方面的凍干藥物組合物，和含水載體液體。
[0023]
在第四方面，本發(fā)明涉及制備包含脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a的用于吸入的脂質(zhì)體水分散體的方法，其通過復溶本發(fā)明的第一方面的凍干藥物組合物來制備該脂質(zhì)體水分散體，該方法包括將根據(jù)本發(fā)明的第一方面的所述凍干藥物組合物分散在含水載體液體中。
[0024]
在第五方面，本發(fā)明涉及液體脂質(zhì)體分散體，其包含含水載體液體和治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a，其通過包括分散根據(jù)本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物的方法分散在含水載體液體中的方法制備。
[0025]
在第六方面，本發(fā)明提供了制備凍干藥物組合物的方法，該凍干藥物組合物包含用于在含水載體液體中復溶的治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a，該方法包括以下步驟：(a)提供脂質(zhì)體的液體水分散體，所述脂質(zhì)體包含：i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；以及可選地
iv.一種或多種其他賦形劑，例如緩沖劑和/或螯合劑；其中所述液體水分散體進一步包含至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，二糖存在的量是所述凍干組合物的總重量的至少40wt％；和(b)凍干所述水分散體。
[0026]
在第七方面，本發(fā)明涉及可通過包括以下步驟的方法獲得的凍干藥物組合物：(a)提供脂質(zhì)體的液體水分散體，所述脂質(zhì)體包含：i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；以及可選iv.一種或多種其他賦形劑，例如緩沖劑和/或螯合劑；其中所述液體水分散體進一步包含至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，二糖存在的量是所述凍干組合物的總重量的至少40wt％；和(b)凍干所述水分散體。
[0027]
在一具體的實施方案中，本發(fā)明的第七方面涉及通過根據(jù)本發(fā)明的第四方面的方法獲得或可獲得的凍干藥物組合物。發(fā)明詳述
[0028]
如本文所使用的術(shù)語“由
…
組成”，“由
…
構(gòu)成”和“由
…
組成”是所謂的封閉式語言，意味著僅存在提到的組分。本文所使用的術(shù)語“包含”，“包括”和“含有”是所謂的開放式語言，意味著還可以存在或可以不存在一個或多個其他組分。
[0029]
術(shù)語“活性藥物成分”(在整個文檔中也稱為“api”)是指可用于預防、診斷、穩(wěn)定、治療或(一般而言)管理病狀、失調(diào)或疾病的任何類型的藥物活性化合物或衍生物。
[0030]
如本文所用，術(shù)語“治療有效量”是指可用于產(chǎn)生所需藥理作用的劑量，濃度或強度。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“治療有效”還包括預防活性。治療劑量的確定取決于個體的應用情況。根據(jù)疾病的性質(zhì)和嚴重性、施用途徑以及患者的身高和狀態(tài)，將以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式確定治療劑量。
[0031]
在本發(fā)明的上下文中，“藥物組合物”是至少一種api和至少一種輔助劑的制劑，輔助劑在最簡單的情況下可以是例如含水液體載體(例如水或鹽水(saline))。
[0032]“一”或“一個”不排除復數(shù)；也就是說，單數(shù)形式的“一”、“一個”和“該”應理解為包括復數(shù)對象，除非上下文明確指出或另有要求。換句話說，對本公開的單數(shù)特征或限制的所有引用應包括相應的復數(shù)特征或限制，反之亦然，除非另外明確指出或在引用的上下文中明顯暗示相反。因此，除非另有定義，否則術(shù)語“一”，“一個”和“該”與“至少一個”或“一個或多個”具有相同的含義。例如，對“一種成分”的提及包括多種成分的混合物等。
[0033]
本文中使用的“大約”或“約”一詞將補償制藥行業(yè)允許的和制藥產(chǎn)品固有的可變性，例如由于制造差異和/或時間引起的產(chǎn)品降解而導致的含量差異。該術(shù)語允許任何變化，這在藥物實踐中將允許所評價的產(chǎn)品被認為在哺乳動物中與所要求保護的產(chǎn)品的所述規(guī)格(strength)具有生物等效性。
[0034]
與屬性或值相關(guān)的“基本上”，“大約”，“約”，“實質(zhì)上”等包括確切的屬性或精確的值，以及通常被認為落在正常范圍內(nèi)的任何屬性或值或相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域中接受的可變性。例如，“基本上不含水”是指制劑中沒有故意包含水，但不排除殘留水分的存在。
[0035]
在本發(fā)明的上下文中，“膠體水溶液”優(yōu)選是指不包含有機溶劑的溶液，該溶液主要由平均直徑為至多100nm和/或多分散指數(shù)(pi)為不大于0.50的單層脂質(zhì)體組成，其中至少主要溶解有活性劑。優(yōu)選地，水，或更具體地鹽水，是制劑中包含的唯一液體溶劑。此外，優(yōu)選制劑是水溶液或膠體水溶液，即單相液體體系。這樣的體系基本上不含具有大于膠體粒徑的分散顆粒。按照慣例，低于約1μm的顆粒被視為膠體顆粒，它們不構(gòu)成單獨的相并且不會導致物理相邊界。有時，大小范圍剛剛超過1μm的顆粒仍被認為是膠體。然而，優(yōu)選地，本文所用的膠體水溶液基本上不含明顯不屬于膠體范圍(spectrum)的顆粒，即，例如直徑為1μm或更大的顆粒。
[0036]
根據(jù)第一方面，本發(fā)明提供了用于在含水載體液體中復溶的凍干藥物組合物，其包括：a)脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)，其包括i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；和b)至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，其中所述至少一種二糖存在的量是所述凍干組合物的總重量的至少40wt％。
[0037]
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以通過對前體溶液或優(yōu)選如下文進一步詳細描述的分散體進行凍干來制備。如本文所用，術(shù)語“凍干”或“凍干的”是指如下的方法，通過該方法將包含溶解或分散的組分的含水或不含水的溶液或分散體在減壓下且通常在低溫下通過升華干燥，如下文進一步詳細描述。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可以通過除去含水溶劑、載體液體、液體溶媒、或前體溶液或分散體的連續(xù)相來制備。
[0038]
本發(fā)明的凍干藥物組合物適合于并可以在含水載體液體中復溶。如本文所用，術(shù)語“復溶的”是指通過凍干方法以固體物質(zhì)形式獲得或產(chǎn)生的凍干藥物組合物可以被重新溶解或重新分散，優(yōu)選地重新分散在含水載體液體中。
[0039]
根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物包含脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)作為組分a)。所述脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)包含治療有效量的環(huán)孢素a(csa)作為第一組分，選自磷脂類的膜形成物質(zhì)作為第二組分，以及選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)作為第三組分。在具體的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物可任選地進一步包含一種或多種(進一步)賦形劑，例如緩沖劑或螯合劑，如下文進一步詳細描述。
[0040]
本發(fā)明的凍干藥物組合物還包含作為組分b)的至少一種選自蔗糖(甘蔗糖；本文所用的術(shù)語“蔗糖”和“甘蔗糖”具有相同的含義并且與β
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呋喃果糖基α
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吡喃葡萄糖苷；cas編號57
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50
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1同義使用，乳糖(β
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吡喃半乳糖基
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(1
→
4)
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葡萄糖；cas編號63
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42
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3)和海藻糖(α
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吡喃葡萄糖基
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(1
→
1)
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α
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吡喃葡萄糖苷；cas編號99
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20
?
7)的二糖，其中至少一種二糖存在的量為凍干組合物的總重量的至少約40wt％。在一些實施方案中，至少一種二糖存在的量為凍干組合物的總重量的至少約40wt％至最高約95wt％或最高約90wt％或最高約85wt％或最高約80wt％。在特定的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含作為二糖的蔗糖和/或海藻糖，優(yōu)選蔗糖，其存在的量為凍干組合物的總重量的至少約40wt％。在進一步的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含海藻糖作為二糖，其存在的量為
凍干組合物的總重量的至少約40wt％。在特定的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可包含所有三種二糖的混合物，即蔗糖、乳糖和海藻糖，或兩種指定的二糖的混合物，即蔗糖和乳糖的混合物或蔗糖和海藻糖的混合物或乳糖和海藻糖的混合物。在這些情況下，凍干組合物的總重量的至少40wt％的含量是指根據(jù)本發(fā)明的凍干組合物所包含的相應二糖的總重量。
[0041]
本發(fā)明藥物組合物的組分a)的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)主要包含由根據(jù)第ii項所述的選自磷脂的一或多種膜形成物質(zhì)所形成的脂質(zhì)雙層膜。當與如下文進一步詳細描述的含水載體液體接觸或復溶時，本文所用的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)能夠形成脂質(zhì)體，優(yōu)選具有閉合的球形雙層膜和內(nèi)腔的脂質(zhì)體。
[0042]
根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物的組分a)的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)包含由選自磷脂的膜形成物質(zhì)所形成的雙層膜。然而，本文所用的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)可以具有或可以不具有連續(xù)或閉合的雙層膜。在特定的實施方案中，脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)可以至少部分地以單層形式存在，或者優(yōu)選地，可以主要以單層形式存在。如本文所用，術(shù)語“單層的”是指相應的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)僅包含由單個脂質(zhì)雙層膜而不是以層狀布置的多個脂質(zhì)雙層膜所形成的單層。
[0043]
在具體的實施方案中，本發(fā)明凍干藥物組合物的組分a)的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)可以包含被由選自磷脂的膜形成物質(zhì)形成的雙層膜包圍或至少部分包圍的內(nèi)腔。然而，在另外的具體實施方案中，脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)可以具有由脂質(zhì)雙層膜或由彼此附著或締合的多個脂質(zhì)雙層膜所構(gòu)建的塌陷或部分塌陷的球體或球狀體的形狀，在內(nèi)腔與周圍之間具有或沒有開口。
[0044]
本發(fā)明凍干藥物組合物的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的內(nèi)腔可以包含或可以不包含殘留的水或含水載體液體。然而，在優(yōu)選的實施方案中，脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的內(nèi)腔至少是部分脫水的。因此，在特定的實施方案中，脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的內(nèi)腔以及脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)通常包含或僅包含殘余量的水或含水載體液體。此外，應當注意，脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的內(nèi)腔可以包含(或包括)或可以不包含(或不包括)選自蔗糖、乳糖和海藻糖的至少一種二糖(的部分)，優(yōu)選海藻糖和/或蔗糖。
[0045]
在優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物包含至少一種二糖，優(yōu)選蔗糖和/或乳糖，特別是蔗糖，其含量基于凍干組合物的總重量計為約50wt％至約80wt％，或約50wt％至約75wt％。在進一步優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物包含至少一種二糖，優(yōu)選蔗糖和/或乳糖，特別是蔗糖，其含量基于凍干組合物的總重量計為約60wt％至約75wt％，甚至優(yōu)選約65wt％至約70wt％。
[0046]
本發(fā)明的凍干藥物組合物包含治療有效量的環(huán)孢素a(csa)，其中環(huán)孢素a在化學上定義為環(huán)
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(2s,3r,4r)
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亮氨酰基
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甲基
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纈氨?；鵠，是具有免疫抑制活性的環(huán)狀肽。
[0047]
在特定的實施方案中，將根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)所包含的治療有效量的csa至少部分地摻入(或嵌入)在脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的雙層膜中。對于csa是親脂性化合物，本文所用的術(shù)語“摻入”是指csa位于或嵌入雙層脂質(zhì)膜的內(nèi)部親脂性部分中，而不是位于脂質(zhì)雙層膜的親水性外表面上(而術(shù)語“表面”可以指形成脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的雙層膜的兩個表
面，或更具體地說是雙層膜的內(nèi)表面或外表面。
[0048]
在優(yōu)選的實施方案中，csa主要摻入脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的雙層膜中。在示例性實施方案中，將本發(fā)明凍干藥物組合物所包含的csa的總量的至少約90％、或甚至至少約95％、或甚至至少約97.5％摻入本發(fā)明脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的雙層膜中。在進一步的示例性實施方案中，將本發(fā)明凍干藥物組合物包含的csa總量的約90％至約97.5％、約90％至約99％、約90％至99.5％、約90％至甚至99.9％、或約95％至約97.5％、約95％至約99％、約95％至99.5％、或約95％至甚至99.9％摻入本發(fā)明的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的雙層膜中。
[0049]
在進一步優(yōu)選的實施方案中，在每種情況下均基于凍干組合物的重量計，本發(fā)明的凍干藥物組合物包含的csa的量為約2wt％至約4wt％，優(yōu)選為約2.2wt％至約3.4wt％，甚至更優(yōu)選為約2.4wt％至約3.4wt％，或約2.4wt％至約3.0wt％，或約2.5wt％至約2.9wt％，或約2.6wt％至約2.8wt％，或約2.65wt％至約2.75wt％。在本發(fā)明凍干藥物組合物的其他具體實施方案中，凍干組合物中的根據(jù)組分b)的至少一種二糖的重量與環(huán)孢素a的重量之比為約10：1至約30：1，或約20：1至約30：1，或約20：1至約27.5：1，或甚至約22.5：1至約27.5：1。
[0050]
根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物的組分a)的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)還包含作為第ii項所述的選自磷脂的膜形成物質(zhì)或選自磷脂的兩種或更多種不同的膜形成物質(zhì)的混合物。如本文所用，術(shù)語“膜形成物質(zhì)”是指在下文將進一步詳細描述的情況下，該膜形成物質(zhì)能夠通過在諸如水或鹽水之類的含水載體液體中自組裝而形成脂質(zhì)雙層膜和/或能夠在含水載體液體中形成脂質(zhì)體。
[0051]
本發(fā)明的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)所包含的優(yōu)選的磷脂尤其是天然或富集的磷脂的混合物，例如卵磷脂，例如可商購的g90，100或lipoid 90，lipoid s 100。因此，在一些實施方案中，選自磷脂的膜形成物質(zhì)是天然磷脂的混合物。
[0052]
磷脂是含有磷的兩親性脂質(zhì)。也被稱為磷酯(phosphatide)，它們在自然界中也起著重要的作用，尤其是作為生物膜的雙層形成成分，并且經(jīng)常用于制藥目的的是那些化學衍生自磷脂酸的磷脂。后者是(通常是雙)酰化的3
?
磷酸甘油，其中的脂肪酸殘基的長度可以不同。磷脂酸的衍生物是，例如，磷酸膽堿或磷脂酰膽堿，其中的磷酸基團還被膽堿酯化了，以及磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇等。卵磷脂是各種磷脂的天然混合物，其通常含有高比例的磷脂酰膽堿。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的磷脂是卵磷脂以及純的或富集的磷脂酰膽堿，例如二肉豆蔻?；字Ｄ憠A，二棕櫚酰基
?
磷脂酰膽堿和二硬脂?；字Ｄ憠A。
[0053]
在其他優(yōu)選的實施方案中，選自磷脂的膜形成物質(zhì)是含有不飽和脂肪酸殘基的卵磷脂。在更優(yōu)選的實施方案中，選自磷脂的膜形成物質(zhì)是卵磷脂，卵磷脂選自大豆卵磷脂，lipoid s100，g90、100或類似的卵磷脂。在另外的優(yōu)選實施方案中，選自磷脂的膜形成物質(zhì)選自lipoid s100、lipoid s75，特別是lipoid s100。
[0054]
在特定的實施方案中，基于凍干組合物的總重量計，選自磷脂(優(yōu)選lipoid s100)的膜形成物質(zhì)的含量為約10wt％或15wt％至約30wt％，優(yōu)選約20wt％至約30wt％，且甚至更優(yōu)選約23wt％至約27wt％。在另外的具體實施方案中，如上所描述的選自磷脂的膜形成物質(zhì)與csa的重量比為約8：1至約11：1，優(yōu)選約8.5：1至約10：1，例如約9：1。
[0055]
根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物的組分a)的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)還包含作為第iii項所
述的選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)或兩種或更多種不同的增溶物質(zhì)的混合物。與其他表面活性劑一樣，非離子表面活性劑具有至少一個相當親水的區(qū)域和至少一個相當親脂的分子區(qū)域。存在單體的、低分子量非離子表面活性劑和具有低聚物或聚合物結(jié)構(gòu)的非離子表面活性劑。適合作為根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的第iii項所述的增溶物質(zhì)的合適的非離子表面活性劑的實例包括聚氧乙烯烷基醚，聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯，例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇油酸酯，聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯，泊洛沙姆，維生素e
?
tpgs(d
?
a
?
生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)和泰洛沙泊。
[0056]
在具體的實施方案中，選自非離子表面活性劑(其選自聚山梨酯和維生素e
?
tpgs)的增溶物質(zhì)優(yōu)選選自聚山梨酯。在一特別優(yōu)選的實施方案中，選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)是聚山梨酯80。
[0057]
在每種情況下均基于凍干組合物的重量計，選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)的含量可以優(yōu)選為約0.01wt％至約5wt％，或約0.1wt％至約4wt％，或約0.5wt％至約3.5wt％，或約1wt％至約3wt％，優(yōu)選約1.5wt％至約2.5wt％，或約1.6wt％至約2.3wt％，或約1.7wt％至約2.1wt％，或約1.8wt％至約2.0wt％。
[0058]
在本發(fā)明的凍干藥物組合物的具體實施方案中，選自磷脂(優(yōu)選卵磷脂)的膜形成物質(zhì)的量大于選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)的量。在示例性實施方案中，選自磷脂(優(yōu)選卵磷脂)的膜形成物質(zhì)與選自非離子表面活性劑(優(yōu)選聚山梨酯)的增溶物質(zhì)的重量比為約15：1至約9：1，優(yōu)選約14：1至約12：1，例如約13：1。
[0059]
在進一步的具體實施方案中，選自磷脂的膜形成物質(zhì)和選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)的總和(一方面)與csa(另一方面)之間的重量比為約5：1至約20：1，優(yōu)選約8：1至約12：1，更優(yōu)選約10：1。
[0060]
在另外的具體實施方案中，選自磷脂(優(yōu)選卵磷脂)的膜形成物質(zhì)、選自非離子表面活性劑(優(yōu)選聚山梨酯)的增溶物質(zhì)與csa之間的重量比為約15：1：1.5至約5：0.3：0.5，優(yōu)選約9：0.7：1。
[0061]
凍干后，根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物可以進一步包含或可以不進一步包含殘留水，其可以與脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的表面締合，或者可以包含在脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的內(nèi)腔中，如上所述。在優(yōu)選的實施方案中，基于凍干藥物組合物的總重量計，凍干組合物所包含的殘留水的量為至多約5wt％，或至多約3wt％，或優(yōu)選至多約2wt％。
[0062]
本發(fā)明的凍干藥物組合物可以進一步包含一種或多種其他賦形劑作為任選組分c)。合適的賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。例如，凍干藥物組合物可以任選地包含ph調(diào)節(jié)劑以調(diào)節(jié)ph，例如生理上可接受的堿、酸或鹽，任選地作為緩沖液混合物。在這種情況下，術(shù)語“生理學上可接受的”并不是指其中一種賦形劑必須能夠單獨耐受并且必須為未稀釋形式(例如氫氧化鈉溶液則并非如此)，反而是指其在凍干藥物組合物中所含的濃度必須是可耐受的，特別是在復溶之后。
[0063]
尤其可以根據(jù)預期的施用途徑選擇用于調(diào)節(jié)ph的合適的ph調(diào)節(jié)劑或緩沖劑。該組中可能有用的賦形劑的實例包括氫氧化鈉溶液，鈉、鈣或鎂的堿性鹽(例如檸檬酸鹽，磷酸鹽，乙酸鹽，酒石酸鹽，乳酸鹽等)，氨基酸，酸性鹽(例如磷酸氫鹽或二氫磷酸鹽，尤其是鈉的那些磷酸氫鹽或二氫磷酸鹽)，還有有機酸和無機酸(例如鹽酸，硫酸，磷酸，檸檬酸，色甘酸(cromoglycinic acid)，乙酸，乳酸，酒石酸，琥珀酸，富馬酸，賴氨酸，蛋氨酸)，鈉或鉀的
酸性磷酸氫鹽等。
[0064]
在本發(fā)明的有益實施方案之一中，凍干的藥物組合物包含緩沖劑以確保復溶后藥物組合物的中性或酸性ph。優(yōu)選地，在復溶之后，本發(fā)明藥物組合物的ph為至多約8.5，或約2.5至約7.5。對于肺部或腸胃外施用，優(yōu)選ph為約4至約7.5，條件是該ph與制劑的其他要求例如穩(wěn)定性方面相容(compatible)。特別優(yōu)選的是用磷酸鹽緩沖劑緩沖的組合物，以確保復溶后ph為6.0至7.5或6.0至7.0或6.3至6.7，從而可以顯著改善組合物的穩(wěn)定性，并且可以有效地減少在儲存過程中不希望的溶血卵磷脂的發(fā)生。
[0065]
此外，本發(fā)明的凍干藥物組合物可以包含或可以不包含滲透活性的輔助劑(adjuvant)，以便在復溶后將其調(diào)節(jié)至所需的摩爾滲透壓濃度(osmolality)，這對于某些應用(例如尤其對于吸入而言)是重要的，以實現(xiàn)良好的耐受性。此類輔助劑通常被稱為“等滲劑”，即使它們的添加不一定會在復溶后產(chǎn)生等滲成分，而是為了達到最佳的生理耐受性而接近等滲壓的等滲性。
[0066]
特別常用的等滲劑是氯化鈉，但這并不適合每種情況。在本發(fā)明的一有益的實施方案中，該制劑不包含氯化鈉，但是天然的普遍存在的氯化鈉的量當然也可以包含在制藥用水中。在另一實施方案中，凍干的藥物組合物包含基本上中性的鹽作為等滲劑，其不是氯化鈉，而是例如硫酸鈉或磷酸鈉。然而，應注意的是，等滲劑也可以包含在含水載體液體中，例如以氯化鈉水溶液(鹽水)的形式。但是，在這種情況下，也可以優(yōu)選鈉鹽以外的鹽。因此，已知某些鈣鹽和鎂鹽在吸入活性劑溶液中具有正作用或支持作用，這可能是因為它們本身抵消了由給藥引起的局部刺激，以及因為它們具有目前在臨床文獻(例如hughes等人，lancet.2003；361(9375):2114
?
7)中推測的支氣管擴張作用，和/或因為它們抑制細菌粘附到呼吸道粘膜蛋白聚糖上，從而間接支持了粘膜纖毛清除作為生物體對病原體的天然防御作用(kw tsang等人，eur.resp.2003.21,932
?
938)。有益的可以是例如硫酸鎂(其具有優(yōu)異的肺耐受性并且可以被無憂地吸入)和氯化鈣(1
?
10mmol)。
[0067]
在另外的具體實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物包含一種或多種其他賦形劑，其選自緩沖劑和螯合劑。適于作為在復溶后調(diào)節(jié)本發(fā)明藥物組合物ph的緩沖劑的示例性化合物包括例如磷酸二氫鈉二水合物和/或磷酸氫二鈉十二水合物，氫氧化鈉溶液，鈉、鈣或鎂的堿性鹽(例如，檸檬酸鹽，磷酸鹽，乙酸鹽，酒石酸鹽，乳酸鹽等)，氨基酸，酸性鹽(例如磷酸氫鹽或磷酸二氫鹽，尤其是鈉的那些磷酸氫鹽或磷酸二氫鹽)，還有有機酸和無機酸(例如鹽酸，硫酸，磷酸，檸檬酸，色甘酸，乙酸，乳酸，酒石酸，琥珀酸，富馬酸，賴氨酸，蛋氨酸)，鈉或鉀的酸性磷酸氫鹽等，以及如上所述的其他緩沖體系。在另外的具體實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物包含一種或多種其他賦形劑，其選自螯合劑，例如，乙二胺四乙酸二鈉二水合物，乙二胺四乙酸鈣鈉(edta鈣鈉)，優(yōu)選乙二胺四乙酸二鈉二水合物。
[0068]
在進一步的實施方案中，本發(fā)明的凍干組合物可以基本上由以下組成：藥學上有效量的csa；選自磷脂的一種或多種膜形成物質(zhì)；選自非離子表面活性劑的一種或多種增溶物質(zhì)；至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，其中所述至少一種二糖存在的量是所述凍干組合物的總重量的至少40wt％；以及可選的其他賦形劑和可選的殘留量的水。
[0069]
在一示例性的實施方案中，本發(fā)明的凍干藥物組合物包含以下，或與其他任選的賦形劑一起基本上由以下組成或由以下組成，優(yōu)選包含以下(各自基于凍干藥物組合物的
總重量計)：環(huán)孢素a：
??????????2?
4wt％二糖：
?????????????
40
?
80wt％磷脂：
?????????????
10
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40wt％非離子表面活性劑： 0.01
?
10wt％緩沖劑：
???????????1?
6wt％螯合劑：
???????????
0.05
?
0.5wt％，其中各組分的總和占最終凍干藥物組合物的100wt％。應當注意，以上給出的值和范圍是基于凍干且完全無水的組合物計算的。然而，出于實際原因，除以上列出的組分外，凍干的組合物還可以包含或可以不包含基于凍干藥物組合物的重量計為約0至約5wt％的殘留量的水。
[0070]
在一優(yōu)選的示例性實施方案中，本發(fā)明的凍干藥物組合物包含以下，或與其他任選的賦形劑一起基本上由以下組成或由以下組成，優(yōu)選包含以下(各自基于凍干藥物組合物的總重量計)：環(huán)孢素a：
??????????2?
4wt％二糖：
?????????????
50
?
75wt％磷脂：
?????????????
15
?
40wt％非離子表面活性劑： 0.1
?
4wt％緩沖劑：
???????????2?
6wt％螯合劑：
???????????
0.05
?
0.5wt％，其中各組分的總和占最終凍干藥物組合物的100wt％，并且其中除以上列出的組分之外，凍干組合物還可以包含或可以不包含基于凍干藥物組合物的重量計為約0至約2wt％的殘留量的水。
[0071]
在一特別優(yōu)選的示例性實施方案中，本發(fā)明的凍干藥物組合物包含以下，或與其他任選的賦形劑一起基本上由以下組成或由以下組成，優(yōu)選包含以下(各自基于凍干藥物組合物的總重量計)：環(huán)孢素a：
??????????
2.5
?
3wt％二糖：
?????????????
60
?
75wt％磷脂：
?????????????
20
?
30wt％非離子表面活性劑： 1
?
3wt％緩沖劑：
???????????3?
5wt％螯合劑：
???????????
0.05
?
0.2wt％，其中各組分的總和占最終凍干藥物組合物的100wt％，并且其中除以上列出的組分之外，凍干組合物還可以包含或可以不包含基于凍干藥物組合物的重量計為約0至約2wt％的殘留量的水。在這些組合物中，“磷脂”優(yōu)選為lipoid s75或lipoid s100，優(yōu)選lipoid s100；“二糖”優(yōu)選是蔗糖(甘蔗糖)；“非離子表面活性劑”優(yōu)選是聚山梨酯，尤其是聚山梨酯80。
[0072]
如上所述，可以將凍干的藥物組合物溶解或分散，優(yōu)選分散在含水載體液體如水或鹽水中，優(yōu)選以無菌形式分散，以得到脂質(zhì)體溶解形式的csa的膠體水分散體(本文也稱
為“l(fā)
?
csa”)，如下文進一步詳細描述的。根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物的關(guān)鍵優(yōu)點之一是，與包含脂質(zhì)體包封形式的csa的其他藥物組合物相比，脂質(zhì)體溶解的csa的穩(wěn)定性增強并延長。此外，根據(jù)本發(fā)明的凍干藥物組合物可通過分散在含水載體液體中而容易且毫不費力地復溶，其中通過復溶脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)而形成的脂質(zhì)體表現(xiàn)出平均尺寸分布與凍干之前最初形成的脂質(zhì)體的平均尺寸分布相當，如下文進一步詳述。
[0073]
不希望受到理論的束縛，這可以歸因于二糖的穩(wěn)定作用，所述二糖選自蔗糖、乳糖和海藻糖，并且其存在的量是凍干藥物組合物的總重量的至少40wt％。此外，本發(fā)明的凍干藥物組合物的上述有益特性可以歸因于以下事實：選自蔗糖、乳糖和海藻糖(優(yōu)選蔗糖)的二糖存在于脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的外部以及內(nèi)腔中。
[0074]
本發(fā)明的藥物組合物可以按照下文詳細描述的方法制備，并且在凍干后，通常以無色或幾乎無色的固體或粉末形式獲得。
[0075]
在第二方面，本發(fā)明提供了用于在含水載體液體中復溶的凍干藥物組合物，其包括：a)脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)，其包括i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；和b)至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，其中所述至少一種二糖存在的量是所述凍干組合物的總重量的至少40wt％，該凍干藥物組合物用于作為藥物的用途，特別是用于作為肺部施用的藥物的用途。
[0076]
如上所述，本發(fā)明的組合物可用作藥物，尤其是在含水載體液體中復溶后的藥物，用于例如預防和治療自身免疫性疾病，皮膚病，移植后或感覺器官(眼睛，鼻，耳)疾病，全身不適和肺部疾病，例如哮喘，慢性阻塞性支氣管炎，實質(zhì)性肺部疾病和實質(zhì)性肺部炎癥，纖維化肺部疾病和纖維化肺部炎癥，間質(zhì)性肺部疾病和間質(zhì)性肺部炎癥，肺癌，以及優(yōu)選用于預防和治療(尤其是在肺、心臟、骨髓或干細胞移植后，特別優(yōu)選在肺移植后)急性或慢性移植排斥反應以及由此引起的疾病(例如閉塞性細支氣管炎)。它可以進一步用于提高其他藥物的功效，特別是細胞抑制劑的功效，其中環(huán)孢素通過外排泵抑制作用可以實現(xiàn)累加或協(xié)同作用。在個體情況下，鼻、口服、眼、粘膜、腸胃外或局部施用本發(fā)明的組合物可能是有利的。施用可能會受到應用、滴下、噴霧到身體上或體內(nèi)的影響，在對人體的最初測試中，這被證明特別耐受。
[0077]
然而，優(yōu)選地，本發(fā)明的凍干藥物組合物，特別是復溶形式的凍干藥物組合物可用于治療肺部疾病，特別是哮喘，難治性哮喘，慢性阻塞性支氣管炎，實質(zhì)性肺部疾病和實質(zhì)性肺部炎癥，纖維化肺部疾病和纖維化肺部炎癥，間質(zhì)性肺部疾病和間質(zhì)性肺部炎癥，以及優(yōu)選用于預防和治療肺移植術(shù)后的急性和慢性器官移植排斥反應及由其引起的疾病，例如閉塞性細支氣管炎。
[0078]
然而，在優(yōu)選的實施方案中，如以上結(jié)合本發(fā)明的第一方面詳細描述的凍干藥物組合物可用作用于肺部施用的藥物。可以在復溶或更具體地在以上結(jié)合本發(fā)明的第一方面所詳細描述的凍干的藥物組合物在含水載體液體中(優(yōu)選在無菌含水載體液體中)分散以形成膠體溶液或分散體(優(yōu)選形成膠體分散體，如下文進一步詳述)之后，進行肺部施用。
[0079]
在另外的優(yōu)選實施方案中，通過吸入進行用于如上所述用途的凍干藥物組合物的肺部施用。在進一步優(yōu)選的實施方案中，在將組合物(例如通過霧化或氣溶膠化)轉(zhuǎn)化成氣溶膠之后進行肺部施用。在復溶之后，或更具體地，在分散在含水載體液體中之后，可以有利地通過能夠?qū)⑷芤?、膠體制劑或混懸液(例如包含脂質(zhì)體溶解的csa的本發(fā)明組合物)轉(zhuǎn)化成大部分能夠到達肺部外圍的液滴的噴霧器將根據(jù)本發(fā)明的凍干組合物氣溶膠化并施用。實際上，可以使用噴射噴霧器，超聲波噴霧器，壓電噴霧器，電動流體噴霧器，膜噴霧器，電子膜噴霧器或電子振動膜噴霧器。合適的噴霧器的實例包括(philips),(trudell),(pari),lc(pari),lc(pari),(philips/respironics),ih50(beurer),(health&life,schill),microu22(omron),(schill),(boehringer),(pari),(aerogen),aeroneb(aerogen),和(aerogen)設(shè)備系列。
[0080]
然而，優(yōu)選地，可以使用壓電噴霧器，電動流體噴霧器，膜噴霧器，電子膜噴霧器或電子振動膜噴霧器。在這些情況下，合適的霧化器包括(philips/respironics),ih50(beurer),(health&life,schill),microu22(omron),(schill),(boehringer),(pari),(aerogen),aeroneb(aerogen),和(aerogen)設(shè)備系列。
[0081]
在優(yōu)選的實施方案中，通過超聲或電子振動膜霧化器，優(yōu)選地通過振動膜霧化器，例如，aeroneb pro或
?
go或i
?
neb類型的設(shè)備，進行根據(jù)本發(fā)明該方面的用于用途的復溶形式的凍干藥物組合物的肺部施用。
[0082]
在另外的優(yōu)選實施方案中，為了將藥物csa，尤其是如上所述的脂質(zhì)體溶解形式的csa靶向下呼吸道，用電子振動膜噴霧器將根據(jù)本發(fā)明該方面用于用途的組合物氣溶膠化。在一特別優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明用于用途的復溶形式的凍干藥物組合物用噴霧器(pari pharma gmbh)氣溶膠化。
[0083]
霧化器利用穿孔的振動膜霧化液體藥物制劑(例如復溶形式的本發(fā)明的藥物組合物)，從而產(chǎn)生具有低彈道動量和可吸入尺寸范圍(通常低于5μm)內(nèi)高百分比液滴的氣溶膠。由于與傳統(tǒng)的噴霧器(例如噴射霧化器)相比較高的霧化率、較低的藥物浪費和較高的可用藥物百分比(如遞送劑量(dd)和可吸入劑量(rd)所示)，設(shè)計用于更快、更有效地霧化藥物。
[0084]
在第三方面，本發(fā)明提供了一種用于制備用于吸入的脂質(zhì)體水分散體或溶液(優(yōu)選為分散體，尤其是膠體分散體)的試劑盒，脂質(zhì)體水分散體或溶液包含治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的csa，試劑盒包括：根據(jù)本發(fā)明的第一方面的凍干藥物組合物，和無菌含水載體液體。
[0085]
根據(jù)本發(fā)明該方面的試劑盒包含作為第一組分的本發(fā)明第一方面的凍干藥物組
合物，即用于在含水載體液體中復溶的凍干藥物組合物，其包含：a)脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)，包括i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；和b)至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，其中至少一種二糖存在的量是所述凍干組合物的總重量的至少40wt％。
[0086]
可以將上述凍干的藥物組合物提供或包裝在任何合適的容器中，該容器允許在25
°
或25
°
以下或者必要時在降低的溫度下(例如在約2℃至約8℃的范圍內(nèi))在延長的時間內(nèi)(例如12個月或兩年或甚至三年或更長時間)無菌存儲凍干組合物，以及允許凍干組合物與含水載體液體容易組合。因此，本發(fā)明該方面的試劑盒包含作為第二組分的含水載體液體，優(yōu)選無菌含水載體液體。
[0087]
根據(jù)本發(fā)明的第一方面的凍干組合物可以例如(優(yōu)選在無菌條件下)被填充到單劑量或多劑量容器中。
[0088]
在特定的實施方案中，本發(fā)明的第一方面的凍干組合物可以在無菌小瓶(優(yōu)選玻璃小瓶)中提供，其中所述小瓶優(yōu)選地容納凍干藥物組合物的等分試樣(特別是對于如上所述通過吸入進行肺給藥是合適的和必需的)。在示例性實施方案中，根據(jù)本發(fā)明該方面的試劑盒包括作為第一組分的等量凍干藥物組合物，其含量為約150mg至約400mg，優(yōu)選約150mg至約200mg或約350mg至約400mg，對應于每等分試樣或每單位約5mg csa的含量或約10mg csa的含量，或者換句話說，相當于csa的含量為總凍干藥物組合物的約2.7wt％。
[0089]
在優(yōu)選的實施方案中，含水載體液體可以是水或藥學上可接受的鹽或等滲劑的水溶液，并且優(yōu)選可以是無菌的。然而，在優(yōu)選的實施方案中，無菌含水載體液體是氯化鈉水溶液，優(yōu)選具有全部0.25％(w/v)的氯化鈉含量。此外，無菌含水載體液體可以進一步包含一種或多種緩沖劑，優(yōu)選如以上結(jié)合根據(jù)本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物所描述的緩沖劑。優(yōu)選地，無菌含水載體液體(特別是氯化鈉水溶液)的ph為4.0至7.0，并且具有的摩爾滲透壓濃度為約60至約100mosmol/kg。
[0090]
有利地，當與根據(jù)本發(fā)明該方面的試劑盒提供的一定量或等份凍干藥物組合物組合時，以適合于制備用于吸入的包含csa的脂質(zhì)體水分散體的一或多個量提供無菌含水載體液體。在示例性實施方案中，以約1.10至約1.50ml的量提供無菌含水載體液體(特別是如上所述的氯化鈉水溶液)，以與約185mg的包含約2.7wt％的csa的凍干藥物組合物(相當于5mg csa)的等分試樣組合。在進一步的示例性實施方案中，以約2.20至約2.80ml的量提供無菌含水載體液體(特別是如上所述的氯化鈉水溶液)，以與約375mg的包含約2.7wt％的csa的凍干藥物組合物(相當于10mg csa)的等分試樣組合。
[0091]
然而，在另外的具體實施方案中，除凍干的藥物組合物已經(jīng)包含的這些成分外，無菌含水載體液體，更具體地，作為本發(fā)明試劑盒第二組分的無菌氯化鈉水溶液不包含任何其他賦形劑、緩沖劑或螯合劑。
[0092]
通過根據(jù)本發(fā)明該方面的試劑盒的第一組分和第二組分的組合，可以產(chǎn)生包含脂質(zhì)體溶解形式的csa(l
?
csa)的脂質(zhì)體水分散體。在優(yōu)選的實施方案中，包含脂質(zhì)體溶解形式的csa(l
?
csa)的脂質(zhì)體水分散體是膠體溶液，如下文更詳細描述的。
[0093]
因此，在第四方面，本發(fā)明提供了通過復溶如上所述的本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物來制備用于吸入的包含脂質(zhì)體溶解形式的csa的脂質(zhì)體水分散體的方法，所述方法包括將用于復溶的凍干藥物組合物分散在含水載體液體中，優(yōu)選分散在無菌含水載體液體中。
[0094]
更具體地說，根據(jù)本發(fā)明該方面的方法包括以下步驟：提供凍干的藥物組合物，其包含a)脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)，包括i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；和b)至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，其中至少一種二糖存在的量是凍干組合物的總重量的至少40wt％；以及將所述凍干的藥物組合物分散在無菌含水載體液體中。
[0095]
根據(jù)第一步，根據(jù)本發(fā)明該方面的方法包括提供本發(fā)明第一方面的的凍干藥物組合物的步驟，凍干藥物組合物包含脂質(zhì)體溶解形式(更具體地如上詳細描述的摻入或嵌入脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)形式)的csa。根據(jù)該方法的第二步驟，將所述凍干的藥物組合物溶解或更具體地分散在無菌含水載體液體中，優(yōu)選如以上結(jié)合本發(fā)明的試劑盒所述的無菌含水載體液體中。因此，在本發(fā)明的該方法的優(yōu)選實施方案中，無菌含水載體液體可以是水，或者可以是例如氯化鈉水溶液(其濃度優(yōu)選為約0.25％(w/v))。
[0096]
可以根據(jù)需要選擇凍干藥物組合物的量，以在分散在無菌含水載體液體中之后達到所需的和治療有效量和濃度的csa。在示例性實施方案中，如以上結(jié)合根據(jù)本發(fā)明第三方面的試劑盒所討論的，特定的等分試樣，例如約150mg至約400mg或更特別地約185mg或約375mg本發(fā)明第一方面的凍干組合物的等分試樣(其環(huán)孢素a的示例性含量為約2.7wt％(即，csa含量為約5mg至約10mg，或相對于csa含量為約5mg或約10mg的特定量))可以分散在無菌含水載體液體(如鹽水)的等分試樣中，無菌含水載體液體體積范圍為約1.10ml至約2.80ml，或更具體地為1.10ml至約1.50ml或約2.20ml至約2.80ml。
[0097]
然而，一般而言，包含csa的凍干藥物組合物的量以及無菌含水載體液體的量各自可以適當?shù)貜膶挿秶鷥?nèi)選擇，以產(chǎn)生用于吸入的脂質(zhì)體水分散體，脂質(zhì)體水分散體包含一定濃度的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a，其濃度允許施用，特別是允許通過吸入霧化或氣溶膠化的分散體的施用，從而可以將治療有效量的csa遞送至靶組織或器官，尤其是患者的肺部。在優(yōu)選的實施方案中，所得的用于吸入的包含脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a的脂質(zhì)體水分散體包含脂質(zhì)體溶解的csa(l
?
csa)，脂質(zhì)體溶解的csa的濃度為約1mg/ml至約10mg/ml，優(yōu)選約2mg/ml至約8mg/ml，更優(yōu)選2.5mg/ml至約6mg/ml，甚至更優(yōu)選3mg/ml至約4mg/ml，尤其是濃度為約4mg/ml。
[0098]
將本發(fā)明的凍干藥物組合物溶解或分散在無菌含水載體液體中的步驟通常通過使凍干藥物組合物與所選的無菌含水載體液體接觸而容易地實現(xiàn)，方法是將載體液體加入到凍干組合物中，或反之亦然，然而，優(yōu)選通過將選定量的無菌含水載體液體添加到選定量的凍干組合物中。如果有必要，則可以通過緩慢攪拌或搖動來支持或加速溶解或分散步驟，通常不需要其他混合裝置或設(shè)備。通常，將本發(fā)明的凍干藥物組合物溶解在無菌含水載體
中的步驟在短時間內(nèi)完成，例如至多600秒，優(yōu)選至多400秒或更短，例如至多300秒。
[0099]
因此，本發(fā)明還提供了凍干藥物組合物，例如根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合物，或通過如下文進一步詳細描述的通過其制備方法獲得或可獲得的凍干藥物組合物，其中凍干藥物組合物可以在短時間內(nèi)(例如最長600秒內(nèi)，優(yōu)選最長400秒或更短，例如最長300秒)將溶解于含水載體液體中。
[0100]
在第五方面，本發(fā)明提供了包含含水載體液體和治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的csa的液體脂質(zhì)體分散體，其通過包括以下步驟的方法制備：將本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物分散在含水載體液體中(優(yōu)選在無菌含水載體液體中)。更具體地，根據(jù)該方面，本發(fā)明涉及包含含水載體液體和治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a的液體脂質(zhì)體分散體，其通過如上文詳細描述的包括以下步驟的本發(fā)明第四方面的方法制備或獲得：提供凍干藥物組合物，其包含a)脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)，包括i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；和b)至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，其中至少一種二糖存在的量是凍干組合物的總重量的至少40wt％；以及將所述凍干藥物組合物分散在無菌含水載體液體中。
[0101]
在優(yōu)選的實施方案中，凍干藥物組合物和含水載體液體的量可以在上述示例性范圍內(nèi)選擇。在進一步優(yōu)選的實施方案中，可以對包含含量為凍干組合物的總重量的至少40wt％的至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖的凍干藥物組合物的量以及含水載體液體的量進行選擇，使得所得的液體脂質(zhì)體分散體具有的至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖的含量為所得的液體脂質(zhì)體分散體的總重量的約5wt％至約15wt％，優(yōu)選約7.5wt％至約12.5wt％。
[0102]
在特別優(yōu)選的實施方案中，在所得的液體脂質(zhì)體分散體中存在的至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖的量為約5wt％至約10wt％，或約7.5wt％至約10wt％，或約7.5wt％或約10wt％，均基于液體脂質(zhì)體分散體總重量計算。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，所得的包含脂質(zhì)體溶解形式的csa的脂質(zhì)體分散體顯示出與已經(jīng)制備的脂質(zhì)體溶解的csa的液體分散體(l
?
csa)等效或相當?shù)奶卣?，所述脂質(zhì)體溶解的csa的液體分散體的制備無需事先凍干可溶解csa的脂質(zhì)體或不存在二糖，如下文進一步詳細描述的。
[0103]
在具體的實施方案中，包括含水載體液體和治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的csa的液體脂質(zhì)體分散體，其通過包括以下步驟的方法制備：將本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物分散在如上所述的含水載體液體中，液體脂質(zhì)體分散體是乳白色的分散體或溶液。在進一步的實施方案中，液體脂質(zhì)體分散體基本上不含可見顆粒。所述分散體所包含的脂質(zhì)體優(yōu)選具有平均直徑，或更具體地，如通過使用malvern zetasizer的光子相關(guān)光譜法測量的至多約100nm的z
?
平均直徑。優(yōu)選地，液體脂質(zhì)體分散體包含的脂質(zhì)體具有的通過光子相關(guān)光譜法(malvern zetasizer)測量的z
?
平均直徑為約40nm至約100nm，甚至更優(yōu)選為約40nm至約70nm。
[0104]
在進一步的具體實施方案中，根據(jù)本發(fā)明該方面的液體脂質(zhì)體分散體具有的如通
過光子相關(guān)光譜法測量的多分散指數(shù)(pi)為至多約0.50，優(yōu)選地至多約0.4，甚至更優(yōu)選為約0.1至約0.3。
[0105]
在進一步的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明該方面的液體脂質(zhì)體分散體的摩爾滲透壓濃度為約300至約550mosmol/kg，優(yōu)選約430至約550mosmol/kg。根據(jù)本發(fā)明該方面的液體脂質(zhì)體分散體的ph值優(yōu)選為約6.0至7.0。在進一步的實施方案中，在1:10稀釋后，根據(jù)本發(fā)明該方面的液體脂質(zhì)體分散體的濁度最高為200ntu(比濁法濁度單位)。
[0106]
令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，已通過將本發(fā)明第一方面的包含含量為至少40wt％的選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖的凍干藥物組合物分散在含水載體液體中而制備得到的根據(jù)本發(fā)明該方面的液體脂質(zhì)體分散體包含的脂質(zhì)體與如下文所述的凍干前相應分散體中的脂質(zhì)體相比大小相等或僅稍大。因此，根據(jù)該方面的本發(fā)明提供了包含脂質(zhì)體的液體脂質(zhì)體水分散體，脂質(zhì)體具有通過光子相關(guān)光譜法(malvern zetasizer)測得的作為z
?
平均直徑測得的中值直徑與凍干之前用于制備本發(fā)明的凍干藥物組合物的脂質(zhì)體的z
?
平均直徑相等或最高比其大20％，優(yōu)選最高僅比其大10％，優(yōu)選中值直徑與凍干之前通過根據(jù)依照本發(fā)明第六方面的制備方法的方法形成的脂質(zhì)體相等或最高比其大20％。
[0107]
在第六方面，本發(fā)明提供了制備用于在含水載體液體中復溶的包含治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a的凍干藥物組合物的方法，優(yōu)選用于制備本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物的方法，其中至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖存在的量是凍干組合物的總重量的至少40wt％，該方法包括以下步驟：(a)提供脂質(zhì)體的液體水分散體，所述脂質(zhì)體包含：i治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；以及可選地iv.一種或多種其他賦形劑，例如緩沖劑和/或螯合劑；其中所述液體水分散體進一步包含至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，二糖存在的量是凍干組合物的總重量的至少40wt％；以及(b)凍干所述水分散體。
[0108]
根據(jù)本發(fā)明該方面的方法可用于制備根據(jù)本發(fā)明第一方面的包含治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的csa的凍干藥物組合物。在本發(fā)明該方面的第一步驟(a)中，制備或提供了如上文結(jié)合本發(fā)明其他方面所描述的脂質(zhì)體的液體水分散體，或換言之，脂質(zhì)體在含水載體液體中的分散體?？梢酝ㄟ^將選擇量的csa、選自磷脂的膜形成物質(zhì)和選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)和任選地一種或多種其他賦形劑在如上所述的合適的含水載體液體(例如水或鹽水)中混合來提供所述脂質(zhì)體的液體水分散體。液體水分散體還包含至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，優(yōu)選蔗糖，其存在的量是最終凍干組合物的總重量的至少40wt％。
[0109]
可以在添加液體水分散體的其他組分之前、同時或之后將二糖添加至所選的含水載體液體中。然而，在優(yōu)選的實施方案中，在將其他組分添加到混合物中之前，特別是在將所得混合物暴露于如下所述的均質(zhì)化條件之前，將選擇的二糖(優(yōu)選蔗糖)添加并溶解在含水載體液體中。這可以確保脂質(zhì)體的形成在所選擇的二糖的存在下或更具體地在所選擇的二糖的水溶液中發(fā)生，使得二糖也可以存在或包封在待形成的脂質(zhì)體的內(nèi)腔中或也可被摻
入或嵌入待形成的雙層膜中。在具體的實施方案中，所選擇的二糖可以以與液體水分散體的周圍連續(xù)相中相同的濃度存在于脂質(zhì)體的內(nèi)腔中。
[0110]
在第二步驟(b)中，如上所述在第一步驟(a)中形成的脂質(zhì)體的液體水分散體然后如下文進一步詳細描述地被凍干。
[0111]
在特定的實施方案中，本發(fā)明提供了制備用于在含水載體液體中復溶的包含治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a的凍干藥物組合物的方法，優(yōu)選用于制備本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物的方法，其中至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖存在的量是凍干組合物的總重量的至少40wt％，該方法包括以下步驟：(a1)提供含水混合物，其包含：至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖；選自磷脂的膜形成物質(zhì)；治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；和選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；以及可選地一種或多種其他賦形劑；和(a2)將含水混合物暴露于均質(zhì)化條件；和(b1)將所得的均質(zhì)混合物凍干以形成凍干藥物組合物。
[0112]
如上文已經(jīng)提及的，待根據(jù)步驟(a1)提供的含水混合物還包含合適的含水載體液體或溶媒，優(yōu)選水或鹽水，含水混合物中的其他組分可以溶解或分散于其中。通常，可以以任何合適的方式來制備含水混合物，例如通過提供含水載體液體(優(yōu)選為水)，并添加如上列出的其他組分來制備?；蛘撸梢允紫忍峁┢渌M分，然后可以添加選擇的含水載體液體。然而，在優(yōu)選的實施方案中，提供了所選擇的含水液體載體(優(yōu)選為水)，并且添加了上文提到的其他組分，優(yōu)選以連續(xù)的方式添加。然后所得的混合物可以通過標準技術(shù)攪拌以形成相應的溶液或分散體，必要時優(yōu)選形成均勻分散體。
[0113]
然后在第二步驟(a2)中，將所得的含水混合物(優(yōu)選所得的均勻分散體)暴露于均質(zhì)化條件下，以產(chǎn)生脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a的膠體分散體。在優(yōu)選的實施方案中，所述均質(zhì)化條件包括高壓均質(zhì)化，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如通過使用microfluidics m
?
110eh進行。高壓均質(zhì)化可以單次進行或重復數(shù)次。優(yōu)選地，高壓均質(zhì)化重復進行，例如進行約5至約15次。此外，高壓均質(zhì)化可以在任何合適的壓力下進行，通常在最高約1500巴的壓力下，或在約50至約1500巴的壓力下進行。優(yōu)選地，高壓均質(zhì)化可以重復進行，例如在約100至約1000巴的壓力下(必要時在減小的壓力下)進行約5至約15次。
[0114]
在第三步驟(b1)中包括將所得的均質(zhì)化混合物凍干，優(yōu)選將所得的均質(zhì)膠體分散體凍干以形成凍干的藥物組合物。凍干可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標準技術(shù)進行，例如通過使用lyostar mnl
?
055
?
a/lsacc3e進行。形成本發(fā)明的凍干藥物組合物的凍干可以以連續(xù)的方式進行，例如在恒定壓力和溫度下進行，或者優(yōu)選地可以分步進行，其中凍干方案或方法的每個步驟可以在特定的壓力、溫度下和限定的持續(xù)時間內(nèi)進行。在示例性實施方案中，凍干方法或循環(huán)可包括最高20個連續(xù)步驟，或約2至約15個，優(yōu)選約5至約15個連續(xù)步驟。每個步驟可以例如在約40℃至約
?
60℃的溫度(優(yōu)選約20℃至約
?
50℃的溫度)下在恒定溫度或在可以以一定梯度升高或降低的溫度下進行。此外，每個凍干步驟可在減壓下進行，
例如在低于環(huán)境壓力的壓力下進行，壓力為例如約0.005毫巴至約800毫巴，優(yōu)選約0.009毫巴至約0.500毫巴，或至約0.400毫巴或0.300毫巴。
[0115]
在一優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明該方面的制備凍干藥物組合物的方法包括以下步驟：提供至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖的水溶液，優(yōu)選其中至少一種二糖存在的量是凍干組合物的總重量的至少40wt％；加入選自磷脂的膜形成物質(zhì)以形成第一中間混合物，優(yōu)選為均一分散體的形式；將環(huán)孢素a添加到第一中間混合物中以形成第二中間混合物；向第二中間混合物中添加選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)，以形成第三中間混合物；將所得的第三中間混合物暴露于均質(zhì)化條件，優(yōu)選形成均勻的脂質(zhì)體分散體；和將所得的均質(zhì)化混合物凍干，優(yōu)選將所得的均質(zhì)脂質(zhì)體分散體凍干，以形成凍干藥物組合物。
[0116]
如上所述的凍干通常可以用任意量的所得均質(zhì)化混合物進行。然而，優(yōu)選地，將所得的均質(zhì)化混合物等分或分成幾等份，并在最終包裝(優(yōu)選玻璃小瓶)中填充并凍干。
[0117]
在進一步的優(yōu)選實施方案中，如上所述的方法還包括以下步驟：對中間混合物進行滅菌，優(yōu)選在將所得的中間混合物暴露于均質(zhì)化條件的步驟之后進行。
[0118]
在進一步優(yōu)選的實施方案中，任選的滅菌步驟包括除菌過濾，例如通過使用除菌過濾器，優(yōu)選除菌過濾器的孔徑為約0.2μm。
[0119]
在第七方面，本發(fā)明提供了一種可通過包括以下步驟的方法獲得的凍干藥物組合物：(a)提供脂質(zhì)體的液體水分散體，所述脂質(zhì)體包含：i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；以及可選地iv.一種或多種其他賦形劑，例如緩沖劑和/或螯合劑；其中所述液體水分散體進一步包含至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，二糖存在的量為凍干組合物的總重量的至少40wt％；和(b)凍干所述水分散體。
[0120]
本發(fā)明的當前方面涉及通過如上詳細描述的根據(jù)本發(fā)明第六方面的方法可獲得或獲得的凍干藥物組合物。應當注意，通過上述方法可獲得的凍干藥物組合物對應于根據(jù)本發(fā)明的第一方面的凍干藥物組合物。因此，描述用于本發(fā)明第一方面的凍干藥物組合物以及根據(jù)本發(fā)明第六方面的它的制備方法的所有特征、性質(zhì)、優(yōu)點和技術(shù)效果也適用于當前凍干藥物組合物，其可通過上述其制備方法本身或彼此組合獲得。
[0121]
因此，在特定的實施方案中，本發(fā)明還涉及可通過包括以下步驟的方法獲得的凍干藥物組合物：(a1)提供含水混合物，其包含：至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖；
選自磷脂的膜形成物質(zhì)；治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；和選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；和(a2)將含水混合物暴露于均質(zhì)化條件；和(b1)將所得的均質(zhì)化混合物凍干以形成凍干藥物組合物。
[0122]
更具體地說，本發(fā)明還涉及可通過包括以下步驟的方法獲得的凍干藥物組合物：提供至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖的水溶液，優(yōu)選其中至少一種二糖存在的量為凍干組合物總重量的至少40wt％；加入選自磷脂的膜形成物質(zhì)以形成第一中間混合物，優(yōu)選為均勻分散體的形式；將csa添加到第一中間混合物中以形成第二中間混合物；向第二中間混合物中添加選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)，以形成第三中間混合物；將所得的第三中間混合物暴露于均質(zhì)化條件，優(yōu)選形成均勻的脂質(zhì)體分散體；和將所得均質(zhì)化混合物凍干，優(yōu)選將所得均勻脂質(zhì)體分散體凍干，以形成凍干藥物組合物。
[0123]
應當注意，在可獲得凍干藥物組合物的方法中，溶解csa的脂質(zhì)體的水分散體的形成在包含選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖的含水載體液體中進行，或者換句話說，脂質(zhì)體是在二糖存在下形成的。然而，這導致所選的二糖摻入溶解csa的脂質(zhì)體的內(nèi)腔中。除了二糖的凍干保護作用外，這還導致本發(fā)明的凍干藥物組合物具有令人驚訝的獨特特性，例如凍干形式和復溶形式的令人驚訝的穩(wěn)定性以及它們的令人驚訝的溶解性。
[0124]
以下是本發(fā)明包括的編號標記實施方案的列表：
[0125]
1.一種用于在含水載體液體中復溶的凍干藥物組合物，其包含：a)脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)，其包括i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；和b)至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，其中至少一種二糖存在的量是凍干組合物總重量的至少40wt％。
[0126]
2.根據(jù)第1項所述的組合物，其中至少一種二糖存在的量是凍干組合物總重量的在50wt％至80wt％。
[0127]
3.根據(jù)第1或2項所述的組合物，其中至少一種二糖存在的量是凍干組合物總重量的60wt％至75wt％。
[0128]
4.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)包含由選自磷脂的膜形成物質(zhì)形成的雙層膜。
[0129]
5.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)至少部分以單層形式存在。
[0130]
6.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)包括被由選自磷脂
的膜形成物質(zhì)形成的雙層膜包圍或至少部分包圍的內(nèi)腔。
[0131]
7.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的內(nèi)腔是至少部分脫水的。
[0132]
8.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中所述脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的內(nèi)腔包含選自以下的至少一種二糖(的部分)：蔗糖、乳糖和海藻糖。
[0133]
9.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中所述csa至少部分地摻入(或嵌入)在脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的雙層膜中。
[0134]
10.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中所述csa主要(例如至少約90％或甚至至少約95％至約97.5％)摻入脂質(zhì)體形成結(jié)構(gòu)的雙層膜中。
[0135]
11.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中基于凍干組合物的重量計，組合物包含的環(huán)孢素a的量為2wt％至4wt％。
[0136]
12.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中凍干組合物中的至少一種二糖的重量與環(huán)孢素a的重量之比為10：1至30：1。
[0137]
13.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中至少一種二糖是蔗糖和/或乳糖。
[0138]
14.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中至少一種二糖是蔗糖。
[0139]
15.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中選自磷脂的膜形成物質(zhì)是天然磷脂的混合物。
[0140]
16.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中選自磷脂的膜形成物質(zhì)是含有不飽和脂肪酸殘基的卵磷脂。
[0141]
17.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中選自磷脂的膜形成物質(zhì)是卵磷脂，卵磷脂選自大豆卵磷脂、lipoid s75、lipoid s100、g90、100或類似的卵磷脂。
[0142]
18.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中基于凍干組合物的重量計，選自磷脂的膜形成物質(zhì)的含量為約10wt％至約30wt％，優(yōu)選約20wt％至約30wt％。
[0143]
19.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中基于凍干組合物的重量計，選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)的含量可以優(yōu)選為約0.01wt％至約5wt％，或約0.1wt％至約4wt％，或約0.5wt％至約3.5wt％，或約1wt％至約3wt％，優(yōu)選約1.5wt％至約2.5wt％。
[0144]
20.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)選自聚山梨酯。
[0145]
21.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)是聚山梨酯80。
[0146]
22.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中磷脂與聚山梨酯的重量比為15：1至9：1，優(yōu)選約14：1至約12：1，例如，約13：1。
[0147]
23.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中一方面的磷脂和非離子表面活性劑(的總和)與另一方面的csa之間的重量比為約5：1至約20：1，優(yōu)選約8：1至約12：1，更優(yōu)選約10：1。
[0148]
24.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中磷脂(卵磷脂)、非離子表面活性劑和環(huán)孢素a之間的重量比為約15：1：1.5至5：0.3：0.5，優(yōu)選約9：0.7：1。
[0149]
25.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中凍干組合物包含的殘留水的量為
至多2wt％。
[0150]
26.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中所述組合物包含一種或多種其他賦形劑。
[0151]
27.根據(jù)第26項所述的組合物，其中一種或多種其他賦形劑選自緩沖劑和螯合劑。
[0152]
28.根據(jù)前述項目中任一項所述的組合物，其中所述凍干組合物基本上由以下組成：環(huán)孢素a；選自磷脂的膜形成物質(zhì)；選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖；以及可選的其他賦形劑和殘留量的水。
[0153]
29.根據(jù)前述項目中任一項所述凍干藥物組合物，其用于用作肺部施用的藥物的用途。
[0154]
30.根據(jù)第29項所述的用于用途的凍干藥物組合物，其中在將權(quán)利要求1
?
29中任一項所述的凍干藥物組合物在含水載體液體中復溶(分散)以形成膠體溶液或分散體之后進行肺部施用。
[0155]
31.根據(jù)第29或30項所述的用于用途的凍干藥物組合物，其中在將組合物轉(zhuǎn)化成氣溶膠之后，(例如通過霧化轉(zhuǎn)化)，進行肺部施用。
[0156]
32.根據(jù)項29至31中任一項所述的用于用途的凍干的藥物組合物，其中肺部施用通過吸入進行。
[0157]
33.根據(jù)第29至32項中任一項所述的用于用途的凍干藥物組合物，其中肺部施用通過超聲或電子振動膜霧化器進行，優(yōu)選地通過振動膜霧化器如aeroneb pro或
?
go或i
?
neb類型的設(shè)備進行。
[0158]
34.根據(jù)第29至33項中任一項所述的凍干藥物組合物，其用于預防和治療哮喘、難治性哮喘、慢性阻塞性支氣管炎、實質(zhì)性肺部疾病和實質(zhì)性肺部炎癥、纖維化肺部疾病和纖維化肺部炎癥、間質(zhì)性肺部疾病和間質(zhì)性肺部炎癥，以及優(yōu)選用于預防和治療肺移植術(shù)后急性和慢性器官移植排斥反應以及由其引起的疾病，例如閉塞性細支氣管炎。
[0159]
35.用于制備用于吸入的脂質(zhì)體水分散體的試劑盒，所述脂質(zhì)體水分散體包含治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a，所述試劑盒包括第1至28項中任一項所述的凍干藥物組合物，和含水載體液體。
[0160]
36.根據(jù)第35項所述的試劑盒，其中無菌含水載體液體是氯化鈉水溶液。
[0161]
37.根據(jù)第35或36項所述的試劑盒，其中無菌含水載體液體還包含一種或多種緩沖劑。
[0162]
38.根據(jù)第35至37項中的任一項所述的試劑盒，其中包含脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a的脂質(zhì)體水分散體是膠體溶液。
[0163]
39.通過復溶根據(jù)權(quán)利要求1
?
28中任一項所述的凍干藥物組合物來制備用于吸入的包含脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a的脂質(zhì)體水分散體的方法，所述方法包括將根據(jù)第1至28項中任一項所述的凍干藥物組合物分散在無菌含水載體液體中。
[0164]
40.根據(jù)第39項所述的方法，其中所述無菌含水載體液體是氯化鈉水溶液，優(yōu)選濃度為約0.25％(w/v)。
[0165]
41.根據(jù)第39或40項所述的方法，其中將186mg或372mg的根據(jù)權(quán)利要求1至20中任一項所述的凍干組合物的等分試樣分散在體積為1.2至2.4ml的鹽水等分試樣中。
[0166]
42.根據(jù)第39至41項中任一項所述的方法，其中將根據(jù)第1至28項中任一項所述的凍干藥物組合物溶解在無菌含水載體中的步驟在最多300秒內(nèi)完成。
[0167]
43.液體脂質(zhì)體分散體，其包含含水載體液體和治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a，其通過包括以下的方法制備：將第1至28項中任一項所述的凍干藥物組合物分散在含水載體液體中。
[0168]
44.根據(jù)第43項所述的液體脂質(zhì)體分散體，其通過第39至42項中任一項所述的方法制備或獲得。
[0169]
45.根據(jù)第43或44項所述的液體脂質(zhì)體分散體，其中至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖存在的量是液體脂質(zhì)體分散體的總重量的5wt％至15wt％。
[0170]
46.根據(jù)第43至45項中任一項所述的脂質(zhì)體液體分散體，其中至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖存在的量是液體脂質(zhì)體分散體的總重量的7.5wt％至12.5wt％。
[0171]
47.根據(jù)第43至46項中任一項所述的液體脂質(zhì)體分散體，其中分散體的摩爾滲透壓濃度為約430至約550mosmol/kg。
[0172]
48.根據(jù)第43至47項中任一項所述的液體脂質(zhì)體分散體，其中分散體具有的如通過光子相關(guān)光譜法測量的多分散指數(shù)(pi)為至多約0.50。
[0173]
49.根據(jù)第43至48項中任一項所述的液體脂質(zhì)體分散體，其中分散體基本上不含可見顆粒。
[0174]
50.根據(jù)第43至49項中任一項所述的液體脂質(zhì)體分散體，其中分散體包含脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體具有的通過光子相關(guān)光譜法測量的z
?
平均直徑為約40nm至約100nm。
[0175]
51.根據(jù)第43至50項中任一項所述的液體脂質(zhì)體分散體，其中分散體包含脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體的通過光子相關(guān)光譜法測得的z
?
平均直徑與凍干之前用于制備根據(jù)第1至28項中任一項所述的凍干藥物組合物的脂質(zhì)體的z
?
平均直徑相等或最高比其大20％，優(yōu)選地，其通過光子相關(guān)光譜法測得的z
?
平均直徑與凍干前通過根據(jù)第53項所述的方法形成的脂質(zhì)體相等或最高比其大20％。
[0176]
52.根據(jù)第43至51項中任一項所述的液體脂質(zhì)體分散體，其中分散體在1:10稀釋后具有的濁度最高為200ntu(比濁法濁度單位)。
[0177]
53.制備用于在含水載體液體中復溶的凍干藥物組合物的方法，優(yōu)選用于制備根據(jù)第1至28項中任一項所述的凍干藥物組合物的方法，所述凍干藥物組合物包含治療有效量的脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a，所述方法包括以下步驟：(a)提供脂質(zhì)體的液體水分散體，所述脂質(zhì)體包含：i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；以及可選地iv.一種或多種其他賦形劑，例如緩沖劑和/或螯合劑；其中所述液體水分散體進一步包含至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，二糖存在的量是所述凍干組合物的總重量的至少40wt％；和(b)凍干所述水分散體。
[0178]
54.根據(jù)第53項所述的方法，包括以下步驟：(a1)提供含水混合物，其包含：
至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖；選自磷脂的膜形成物質(zhì)；治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；和選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；以及可選一種或多種其他賦形劑和(a2)將含水混合物暴露于均質(zhì)化條件；和(b1)將所得的均質(zhì)混合物凍干以形成凍干藥物組合物。55.根據(jù)第53或54項的方法，包括以下步驟：提供至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖的水溶液；添加選自磷脂的膜形成物質(zhì)以形成第一中間混合物，優(yōu)選為(均勻)分散體的形式；將環(huán)孢素a添加到第一中間混合物中以形成第二中間混合物；向第二中間混合物中添加選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)，以形成第三中間混合物；將所得第三中間混合物暴露于均質(zhì)化條件；和將所得的均質(zhì)化混合物凍干以形成凍干藥物組合物。
[0179]
56.根據(jù)第53至55項中任一項所述的方法，進一步包括以下步驟：對中間混合物進行滅菌，優(yōu)選在將所得的中間混合物暴露于均質(zhì)化條件的步驟之后進行。
[0180]
57.根據(jù)第56項所述的方法，其中滅菌步驟包括除菌過濾。
[0181]
58.根據(jù)第54至57項中任一項所述的方法，其中均質(zhì)化條件包括高壓均質(zhì)化。
[0182]
59.根據(jù)第54至58項中任一項所述的方法，其中高壓均質(zhì)化是重復進行的。
[0183]
60.根據(jù)第54至59項中任一項所述的方法，其中高壓均質(zhì)化進行約5至約15次。
[0184]
61.根據(jù)第54至60項中任一項所述的方法，其中高壓均質(zhì)化是在100至1000巴的壓力下進行的。
[0185]
62.根據(jù)第53至61項中任一項所述的方法，其中至少一種二糖存在的量是凍干組合物的總重量的至少40wt％。
[0186]
63.凍干藥物組合物，其可通過包括以下步驟的方法獲得：(a)提供脂質(zhì)體的液體水分散體，所述脂質(zhì)體包含i.治療有效量的環(huán)孢素a(csa)；ii.選自磷脂的膜形成物質(zhì)；和iii.選自非離子表面活性劑的增溶物質(zhì)；以及可選地iv.一種或多種其他賦形劑，例如緩沖劑和/或螯合劑；其中所述液體水分散體進一步包含至少一種選自蔗糖、乳糖和海藻糖的二糖，二糖存在的量是凍干組合物的總重量的至少40wt％；和(b)凍干所述水分散體。
[0187]
64.通過第53至62項中任一項所述的方法獲得或可獲得的凍干藥物組合物。
[0188]
下列實施例用于舉例說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明：
實施例
[0189]
實施例1：制備包含脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a(5mg)的凍干藥物組合物
[0190]
1.1步驟1：脂質(zhì)體溶液的制備：
[0191]
1.1.1將約的注射用水注入制備容器中。通過引入氮氣將其脫氣并加熱至40℃至45℃的溫度。將18.0kg的蔗糖，450.0g的磷酸二氫鈉二水合物，612.0g的磷酸氫二鈉十水合物和36.0g的乙二胺四乙酸二鈉一起添加，并且將約5％(8.0l)的注射用水用于沖洗。攪拌混合物直到獲得視覺上澄清的溶液。將該溶液冷卻至20℃至25℃，并添加6480.0g大豆卵磷脂lipoid s100并攪拌直至獲得均勻的分散體。然后，在溫和攪拌下加入504.0g聚山梨酯80hp(吐溫80)以避免起泡，并且用約100ml注射用水沖洗裝有聚山梨酯的容器。之后，添加720.0g的環(huán)孢素和約5％(8l)的注射用水，并將混合物攪拌直至形成均勻的分散體。
[0192]
1.1.2隨后，將得到的分散體冷卻至5℃至10℃的溫度，并暴露于使用gea高壓均質(zhì)機分別在100巴(第一階段)和1000巴(第二階段)的壓力下的高壓均質(zhì)化。高壓均質(zhì)化重復9次(循環(huán))。
[0193]
1.1.3然后，將所得的均質(zhì)懸浮液通過最小孔徑為0.2μm的生物負荷減少過濾器過濾一次，然后轉(zhuǎn)移至填充/存儲罐中。
[0194]
1.2步驟2：無菌灌裝，凍干和包裝
[0195]
1.2.1將填充體積為10ml的玻璃小瓶在熱風滅菌隧道(hot
?
air sterilizing tunnel)中滅菌，冷卻并填充有根據(jù)上述步驟1制備的在使用兩個具有在填充罐/儲罐和填充針之間的孔徑為0.2μm的除菌過濾器進行無菌滅菌后的分散體的等分試樣1.35ml(5mg劑量)。然后用滅菌的凍干塞子將小瓶部分封閉，并裝入凍干機(gea lyovac fcm)中，并根據(jù)72小時凍干周期凍干。
[0196]
1.2.2在凍干完成后，在凍干室中小瓶會自動完全塞住。取出小瓶并用翻蓋撕開型蓋(flip
?
tear
?
off cap)封閉。每個小瓶包含約190mg幾乎白色、均勻的多孔凍干餅，其中包含5mg脂質(zhì)體溶解形式的環(huán)孢素a，最大殘留水分為2％(w/w)，保存期限為3年。
[0197]
1.2.3如上所述制備的凍干藥物產(chǎn)品的組成總結(jié)在下表1中：
[0198]
表格1：
[0199]
實施例2：復溶包含環(huán)孢素a的凍干組合物以產(chǎn)生用于霧化和吸入的脂質(zhì)體溶解的環(huán)孢素a的膠體溶液
[0200]
2.1向186.1mg根據(jù)上述實施例1制備的含有5mg環(huán)孢素a的凍干餅的等分試樣，加入1.35ml濃度為0.25％(w/v)的無菌氯化鈉水溶液以得到乳白色的用于吸入目的的脂質(zhì)體環(huán)孢素a水溶液，其中csa濃度為4mg/ml。
[0201]
2.2為了制備具有脂質(zhì)體溶解的環(huán)孢素a含量為10mg的相應膠體溶液，將372.3mg根據(jù)上述實施例1制備的凍干餅的等分試樣溶解在2.65ml濃度為0.25％(w/v)的無菌氯化鈉水溶液中，以得到乳白色的用于吸入目的的脂質(zhì)體環(huán)孢素a水溶液，其中csa濃度為4mg/ml。
[0202]
2.3下表2總結(jié)了如上所述制備的復溶藥物產(chǎn)品的組成：
[0203]
表2：
[0204]
實施例3：在乳糖或海藻糖存在下，制備包含脂質(zhì)體溶解形式的csa的凍干組合物及其復溶的脂質(zhì)體溶液
[0205]
3.1按照上述實施例1和實施例2的方案，在海藻糖作為二糖的存在下和在乳糖一水合物的存在下制備包含脂質(zhì)體溶解形式的csa的凍干組合物。兩種二糖的使用量必須使最終復溶的脂質(zhì)體溶液中各自的糖含量分別為7.5％(w/v)和10％(w/v)。此外，除了上面表3中總結(jié)的組成之外，還制備了具有5.0％(w/v)和7.5％(w/v)的蔗糖含量的相應脂質(zhì)體溶液。在所有情況下，均獲得乳白膠體溶液，其多分散指數(shù)(pi)和脂質(zhì)體直徑(以z
?
平均直徑zave衡量)如下表3所示：
[0206]
表3：
[0207]
實施例4：比較凍干前和凍干物復溶后的包含脂質(zhì)體溶解形式的csa的脂質(zhì)體水分散體的特性
[0208]
4.1如實施例1步驟1中所述制備包含10％(w/v)蔗糖的脂質(zhì)體溶解的csa的水分散體。同樣，制備包含10％(w/v)的乳糖的脂質(zhì)體溶解的csa的水分散體。此外，按照實施例1步驟2中所述的方法將包含10％(w/v)蔗糖的水分散液凍干，并按照實施例2中的方法進行復溶。所得的分散液的關(guān)鍵特性總結(jié)于下表4中：
[0209]
表4：
[0210]
實施例5：包含脂質(zhì)體溶解的csa的凍干組合物的穩(wěn)定性；穩(wěn)定性比較
[0211]
5.1包含環(huán)孢素a的凍干組合物的長期穩(wěn)定性
[0212]
5.1.1根據(jù)上述實施例1制備包含環(huán)孢素a(5mg)的凍干藥物組合物。將幾乎白色、均勻、多孔的凍干餅形式的凍干組合物等分在6r玻璃小瓶中，密封并在25℃和60％相對濕度(rh)的空氣濕度下儲存36個月。儲存期之前和之后材料的等分試樣用鹽水(0.25％(w/v))復溶，以得到1.25ml體積的復溶溶液，并且在3個月，6個月，9個月，12個月，18個月，24個月和36個月后測定中值脂質(zhì)體直徑(z
?
平均直徑)，多分散指數(shù)以及環(huán)孢素a的含量。
[0213]
5.1.2發(fā)現(xiàn)在上述儲存期之前和之后，所有參數(shù)均在各自的接受標準之內(nèi)。更具體地，在每個儲存期之前和之后，多分散指數(shù)(pi)小于或等于0.50。此外，在每個儲存期之前和之后，中值脂質(zhì)體直徑(z
?
平均直徑)在40至100nm的規(guī)定范圍內(nèi)。此外，復溶溶液的csa含量在95.0％至105.0％范圍內(nèi)的接受標準內(nèi)。
[0214]
5.1.3在30℃的溫度和65％的相對濕度(rh)的空氣濕度下重復上述長期穩(wěn)定性研究。在三個月，六個月，九個月和十二個月的儲存期之前和之后，發(fā)現(xiàn)上述所有測試參數(shù)均
在其接受標準(如上所述)內(nèi)。
[0215]
5.1.4使用根據(jù)上述實施例1制備的包含環(huán)孢素a(5mg)的凍干藥物組合物重復上述長期穩(wěn)定性研究，然而其中，凍干組合物具有的蔗糖含量須使得復溶后蔗糖含量相對于液體組合物的總量為7.5wt％。
[0216]
5.1.5在這種情況下，也發(fā)現(xiàn)在上述儲存期之前和之后，所有參數(shù)均在其各自的接受標準之內(nèi)。更具體地，在每個儲存期之前和之后，多分散指數(shù)(pi)小于或等于0.50。此外，在每個儲存期之前和之后，中值脂質(zhì)體直徑(z
?
平均直徑)在40nm至100nm的規(guī)定范圍內(nèi)。此外，復溶溶液的csa含量在95.0％至105.0％范圍內(nèi)的接受標準內(nèi)。
[0217]
5.1.6使用包含根據(jù)上述實施例1制備的包含10mg環(huán)孢素a的凍干藥物組合物重復上述5.1.1至5.1.3項中所述的實驗。在這種情況下，也發(fā)現(xiàn)在上述儲存期之前和之后，所有參數(shù)都在其各自的接受標準之內(nèi)。更具體地，在每個儲存期之前和之后，多分散指數(shù)(pi)小于或等于0.50。此外，在每個儲存期之前和之后，中值脂質(zhì)體直徑(z
?
平均直徑)在40nm至100nm的規(guī)定范圍內(nèi)。此外，復溶溶液的csa含量在95.0％至105.0％范圍內(nèi)的接受標準內(nèi)。
[0218]
5.2包含環(huán)孢素a的非凍干液體組合物的長期穩(wěn)定性
[0219]
5.2.1根據(jù)上述實施例1制備csa濃度為4mg/ml的脂質(zhì)體溶解的環(huán)孢素a在鹽水中的液體溶液(0.25％(w/v))，但是不添加二糖并且不進行中間凍干。如上所述，將溶液等分在玻璃小瓶中密封，并在25℃和60％相對濕度(rh)的空氣濕度下儲存。
[0220]
5.2.1儲存3個月后，肉眼觀察到沉淀的形成，這作為脂質(zhì)體溶液物理不穩(wěn)定性的指標。
[0221]
實施例6：霧化實驗和氣溶膠表征
[0222]
6.1通過具有混合室和以根據(jù)歐洲藥典7.3；2.9.44的15l/min的流速的呼吸進/出閥的專門改裝過的pari eflow 30xl型電子振動膜霧化器，對2.5ml(相當于10mg csa)的實施例1制備的膠體溶液進行氣溶膠化。
[0223]
6.2使用malvern mastersizer x通過激光衍射表征由此產(chǎn)生的氣溶膠的液滴粒度分布：如此確定的質(zhì)量平均粒徑為3.3μm(標準偏差(sd)0.1)，幾何標準偏差為1.5。<5μm的可吸入顆粒分數(shù)(rf)為65.3％(sd 2.8)，粒度<3.3μm的可吸入顆粒分數(shù)為37.7％(sd 2.2)。
[0224]
6.3在吸入實驗(成人；流速為15ml/min)中，將總量為9897μg的上述實施例1中所述的復溶液體制劑形式的環(huán)孢素a裝入電子振動膜霧化器(pari eflow 30xl)中并用其進行施用。環(huán)孢素a的遞送劑量(dd)為7339μg(sd：471)?？晌雱┝?rd)<5μm為6534μg(66.0％；sd 4.3％)；rd<3.3μm為4461μg(45.1％；sd 3.2％)，可吸入劑量(rd)<2μm為1080μg(10.9％；sd 0.9％)。