本發明涉及生物醫藥，具體地說是三種海洋來源的芳環衍生物2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(1)，2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(2)，2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(3)及其藥理活性、藥學用途。以上化合物及其衍生物作為dpp-4抑制劑，可以用于治療2型糖尿病。
背景技術：
糖尿病是一種代謝紊亂性疾病，目前患病人數快速增長。國際糖尿病聯盟的最新資料顯示，截止至2017年，世界上約有4.25億成年糖尿病患者，據預測，至2045年，這個數字將增長至7.00億。糖尿病的治療顯得尤為迫切。
二肽基肽酶ⅳ(dpp-4)也稱cd26，是一種多功能的跨膜絲氨酸蛋白酶，主要通過降解腸促胰島素樣肽-1(glp-1)和葡萄糖依賴性胰島素釋放肽(gip)調節葡萄糖代謝。口服的二肽基肽酶ⅳ抑制劑通過抑制二肽基肽酶ⅳ的活性可以延長glp-1和gip在體內的半衰期，glp-1和gip的水平，延長其降糖作用時間，并且抑制胰高血糖素分泌，延長glp-1對胰島素分泌的刺激持續時間，發揮降糖作用。dpp-4抑制劑可穩定控制血糖，改善β細胞功能，并且不會引起患者體質量增加，避免低血糖風險，在用藥安全方面具有顯著優勢，被普遍認為是最有希望的治療2型糖尿病的新靶點。
海洋來源的天然產物一直是降糖藥物的重要來源。從熱帶和亞熱帶地區紅藻laurenciasimilis分離得到的苯基取代類化合物(芳環取代類化合物)，降糖活性ic50為2.66(wanglj等，rscadvances.5(2015),48822)；從海藻rhodomelaconfervoides乙醇提取物中分離得到的芳環類化合物，也具有顯著的降糖活性(shid.y.等,chinaj.chin.mater.med.33(2008),2238)。據此，我們合成了海洋來源的具有顯著dpp-4抑制活性的芳環衍生物2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(1)，2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(2)，2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(3)。
技術實現要素：
本發明目的在于提供三種新型的dpp-4抑制劑，三種化合物通過抑制dpp-4的活性，延長glp-1和gip的作用時間，達到降低血糖的目的，可用于治療2型糖尿病。
為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：
dpp-4抑制劑，其以下述三種化合物中的一種或二種以上為活性成分，三種化合物的結構式如下：
即2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(1)，2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(2)，2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(3)。
本發明的目的是提供3種海洋來源的芳環衍生物在治療2型糖尿病藥物制備中的應用。
本發明的另一目的是提供以化合物1～3中的一種或兩種化合物或其藥學上可接受的鹽作為活性成分，用于制備或預防2型糖尿病的藥物組合物。
上述的藥物組合物(即dpp-4抑制劑)，其組成含有治療有效量的化合物1～3中的一種或兩種或其藥學上可接受的鹽，所說的化合物在藥物組合物中可以單獨使用，也可以與其他藥物配合使用。該藥物組合物含有0.1～99％，優選為0.5～90％的本發明化合物，其余為藥物學上可接受的藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明的藥物可經注射(靜注、肌注)、口服和外用三種形式給藥。
化合物通過抑制二肽基肽酶-4的活性，增加腸促胰島素樣肽-1和葡萄糖依賴性胰島素釋放肽的水平，對于2型糖尿病有著較好的治療作用。
本發明具有如下優點：
所述目標化合物是具有顯著dpp-4酶抑制活性的化合物，是2型糖尿病的治療新藥；本發明引入海洋來源的芳環衍生物，資源豐富，低毒，具有較好的降血糖活性，實現了目標化合物高收率、低成本的合成，且工藝操作簡單，具有良好的產業化生產前景。
附圖說明
圖1為化合物1抑制dpp-4的劑量依賴性圖。
圖2為化合物2抑制dpp-4的劑量依賴性圖。
圖3為化合物3抑制dpp-4的劑量依賴性圖。
1.化合物的合成與結構鑒定
以6-氯尿嘧啶和2-氰基-5-氟溴芐為起始原料，采用取代反應合成中間體；然后與三種不同的芳環衍生物溴芐在嘧啶二酮1位氮上發生芳環衍生物取代，生成芳環衍生物取代中間體；再在嘧啶二酮6位與(r)-3-(boc-氨基)哌啶反應，最后用三氟乙酸脫去叔丁氧羰基得粗品，然后用氯仿-甲醇-三乙胺系統做洗脫劑，硅膠柱色譜精制得白色固體。經波譜數據等結構鑒定為化合物2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(1)，2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(2)，2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(3)；英文名稱分別為:2-[6-(3(r)-aminopiperidin-1-yl)-3-(3,5-difluorobenzyl)-2,4-dioxo-3,4-dihydro-2h-pyrimidin-1-ylmethyl]-4-fluorobenzonitrile(1),2-[6-(3(r)-aminopiperidin-1-yl)-3-(3,5-dimethyl)-2,4-dioxo-3,4-dihydro-2h-pyrimidin-1-ylmethyl]-4-fluorobenzonitrile(2),2-[6-(3(r)-aminopiperidin-1-yl)-3-(3,4-dimethoxybenzyl)-2,4-dioxo-3,4-dihydro-2h-pyrimidin-1-ylmethyl]-4-fluorobenzonitrile(3).
2.二肽基肽酶4抑制活性測定
運用具有聚集誘導發光特性的新型小分子熒光探針來篩選dpp-4抑制劑活性。該小分子熒光探針在反應體系中自身不發熒光，當dpp-4切斷熒光探針的n端二肽后，殘基水溶性降低，發生聚集而產生熒光。該方法對dpp-4的活性檢測具有較高的靈敏度和特異性。
具體實施方式
為了更好地理解本發明的實質，下面將用本發明的實施例來說明此五種化合物的藥理作用結果，但不以此實施例來限定本發明。
化合物的合成路線具體如下所示：
(a)2-氰基-5-氟溴芐與化合物6摩爾比為1:1～1:1.5,二異丙基乙胺，溶劑為n,n-二甲基甲酰胺，室溫；(b)化合物18(或19，或20)與化合物7摩爾比為1:1～1:1.5，碳酸鉀，碘化鉀，室溫；(c)(r)-3-(boc-氨基)哌啶與化合物21(或22，或23)摩爾比為1:1～1:1.5，碳酸鉀，溶劑為n,n-二甲基甲酰胺，惰性氣體保護，80～100℃；(d)三氟乙酸，溶劑為二氯甲烷，室溫；
實施例1“2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(化合物1)”的化學全合成與結構鑒定
(1)2-{[6-氯-3,4-二氫-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成及結構鑒定
室溫攪拌下，向80ml溶有10克6-氯尿嘧啶的n,n-二甲基甲酰胺溶液中加入13.53ml二異丙基乙胺，逐滴加入20ml溶有16克2-氰基-5-氟溴芐(質量濃度15～20％)的n,n-二甲基甲酰胺溶液，避光條件下持續攪拌24小時后，tlc檢測，原料點消失后反應結束，向反應液中加10倍量蒸餾水，有沉淀析出，20min加完，持續攪拌15min，將沉淀過濾，冰水洗滌沉淀，抽干得白色固體，混合物用無水乙醇重結晶，得白色固體14.78克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-氯-3,4-二氫-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈；
(2)2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
室溫條件下，向5ml溶有1克2-{[6-氯-3,4-二氫-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的n,n-二甲基甲酰胺溶液中加入0.59克無水碳酸鉀、0.10克碘化鉀，逐滴加入5ml溶有0.82克3,5-二氟芐溴的n,n-二甲基甲酰胺溶液,避光下反應24小時，tlc檢測，原料點消失后，向反應液中加10倍量蒸餾水，乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，并用質量濃度20％鹽水洗3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮。柱層析色譜分離，石油醚：乙酸乙酯10:1洗脫后得白色固體1.09克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈。
(3)2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
在50ml三頸瓶中，將0.51克無水碳酸鉀、0.55克(r)-3-(boc-氨基)哌啶加到15ml溶有1克2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的n,n-二甲基甲酰胺溶液中，氬氣保護，90℃回流反應3個小時，tlc檢測，原料點消失后，冷卻反應液至室溫。加10倍量蒸餾水，乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，并用質量濃度20％鹽水洗3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，混合物經柱層析色譜分離，石油醚：乙酸乙酯4:1洗脫，得白色固體1.2克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈；
(4)2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
0℃攪拌下，將4.5ml溶有0.9ml三氟乙酸的二氯甲烷溶液加入5ml溶有0.5克2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的二氯甲烷溶液中，tlc檢測，原料點消失后，加冰水猝滅反應，用質量濃度10％的naoh溶液調ph至堿性，加入30ml二氯甲烷萃取3次，合并有機相，質量濃度20％鹽水洗滌3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，混合物經柱層析色譜分離，二氯甲烷-甲醇-三乙胺系統洗脫，得白色固體0.35克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二氟芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈，稱之為化合物1。
該化合物理化性質如下：白色固體，熔點70-72℃；核磁共振氫譜：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.65(dd,j＝8.5,5.3hz,1h),7.12–7.02(m,1h),6.99–6.85(m,1h),6.84(s,1h),6.82(s,1h),6.65(t,j＝9.0hz,1h),5.40(s,1h),5.23(t,j＝10.0hz,2h),4.99(s,2h),3.98(s,1h),3.29–3.17(m,2h),2.94(d,j＝12.0hz,1h),2.70(s,2h),2.03(d,j＝13.0hz,1h),1.82(s,1h),1.66–1.59(m,1h),1.45(d,j＝25.0hz,1h),1.26(d,j＝8.0hz,1h).核磁共振碳譜：13cnmr(126mhz,cdcl3)δ165.2(d,j＝12.7hz),163.8(d,j＝12.7hz),162.5,161.9(d,j＝12.4hz),159.7,152.1,143.9(d,j＝8.7hz),140.2(d,j＝8.9hz),135.6(d,j＝9.5hz),116.5,115.9(d,j＝22.7hz),115.4(d,j＝22.7hz),111.3(dd,j＝19.7,6.0hz),106.6(d,j＝3.2hz),103.1(dd,j＝25.2,26.5hz),90.2,56.1,51.8,47.2,46.6,43.6,30.4,29.7.
實施例2“2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(化合物2)”的化學全合成與結構鑒定
(1)2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
室溫條件下，向5ml溶有1克2-{[6-氯-3,4-二氫-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的n,n-二甲基甲酰胺溶液中加入0.59克無水碳酸鉀、0.10克碘化鉀，逐滴加入5ml溶有0.79克3,5-二甲基芐溴的n,n-二甲基甲酰胺溶液,避光下反應24小時，tlc檢測，原料點消失后，向反應液中加10倍量蒸餾水，乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，并用質量濃度20％鹽水洗3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮。柱層析色譜分離，石油醚：乙酸乙酯8:1洗脫后得白色固體1.15克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈。
(2)2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
在50ml三頸瓶中，將0.49克無水碳酸鉀、0.52克(r)-3-(boc-氨基)哌啶加到15ml溶有1克2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的n,n-二甲基甲酰胺溶液中，氬氣保護，90℃回流反應4個小時，tlc檢測，原料點消失后，冷卻反應液至室溫。加10倍量蒸餾水，乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，并用質量濃度20％鹽水洗3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，混合物經柱層析色譜分離，石油醚：乙酸乙酯3:1洗脫，得白色固體1.18克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈；
(3)2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
0℃攪拌下，將4.5ml溶有0.9ml三氟乙酸的二氯甲烷溶液加入5ml溶有0.5克2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的二氯甲烷溶液中，tlc檢測，原料點消失后，加冰水猝滅反應，用質量濃度10％的naoh溶液調ph至堿性，加入30ml二氯甲烷萃取3次，合并有機相，質量濃度20％鹽水洗滌3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，混合物經柱層析色譜分離，二氯甲烷-甲醇-三乙胺系統洗脫，得白色固體0.34克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,5-二甲基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈，稱之為化合物2。
該化合物理化性質如下：白色固體，熔點115～117℃；核磁共振氫譜：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.63(dd,j＝8.5,5.3hz,1h),7.03(t,j＝7.0hz,1h),6.90(s,1h),6.90(s,1h),6.88(s,1h),6.84(s,1h),5.44(s,1h),5.24–5.16(m,2h),4.94(s,2h),3.43(s,1h),3.41(s,1h),3.38(s,1h),2.92(s,1h),2.86(d,j＝11.5hz,1h),2.65(s,1h),2.22(s,6h),2.10(s,1h),1.79(s,1h),1.66–1.56(m,2h),1.27–1.23(m,1h).核磁共振碳譜：13cnmr(126mhz,cdcl3)δ165.1(d,j＝259.56hz),163.0,159.2,152.1,144.2(d,j＝8.82hz),137.9,136.4,135.6(d,j＝10.8hz),129.3,126.0,116.7,115.8(d,j＝23.94hz),115.5(d,j＝25.2hz),106.6,90.6,54.0,53.4,51.8,47.3,46.6,44.4,28.6,21.2.
實施例3“2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈(化合物3)”的化學全合成與結構鑒定
(1)2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
室溫條件下，向5ml溶有1克2-{[6-氯-3,4-二氫-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的n,n-二甲基甲酰胺溶液中加入0.54克無水碳酸鉀、0.10克碘化鉀，逐滴加入5ml溶有0.75克3,4-二甲氧基芐溴的n,n-二甲基甲酰胺溶液,避光下反應24小時，tlc檢測，原料點消失后，向反應液中加10倍量蒸餾水，乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，并用質量濃度20％鹽水洗3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮。柱層析色譜分離，石油醚：乙酸乙酯3:1洗脫后得白色固體1.15克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈。
(2)2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
在50ml三頸瓶中，將0.62克無水碳酸鉀、0.6克(r)-3-(boc-氨基)哌啶加到15ml溶有1.28克2-{[6-氯-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的n,n-二甲基甲酰胺溶液中，氬氣保護，90℃回流反應3個小時，tlc檢測，原料點消失后，冷卻反應液至室溫。加10倍量蒸餾水，乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，并用質量濃度20％鹽水洗3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，混合物經柱層析色譜分離，石油醚：乙酸乙酯3:2洗脫，得白色固體1.16克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈；
(3)2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的化學合成
0℃攪拌下，將4.5ml溶有0.9ml三氟乙酸的二氯甲烷溶液加入5ml溶有0.55克2-{[6-[(3r)-3-boc-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈的二氯甲烷溶液中，tlc檢測，原料點消失后，加冰水猝滅反應，用質量濃度10％的naoh溶液調ph至堿性，加入30ml二氯甲烷萃取3次，合并有機相，質量濃度20％鹽水洗滌3次，有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，混合物經柱層析色譜分離，二氯甲烷-甲醇-三乙胺系統洗脫，得白色固體0.39克。經過波譜分析，確證該化合物為2-{[6-[(3r)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氫-3-(3,4-二甲氧基芐基)-2,4-二氧代-1(2h)-嘧啶基]甲基}-4-氟苯甲腈，稱之為化合物3。
該化合物理化性質如下：白色固體，熔點75～77℃；核磁共振氫譜：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.67(dd,j＝8.5,5.3hz,1h),7.07(dd,j＝8.0,2.1hz,1h),7.05(s,1h),7.03(d,j＝8.0hz,1h),6.80(d,j＝2.0hz,1h),6.77(d,j＝8.0hz,1h),5.37(s,1h),5.25(s,2h),5.02(s,2h),3.84(s,3h),3.83(s,3h),3.00(d,j＝11.0hz,1h),2.91(d,j＝4.5hz,1h),2.90(s,1h),2.59(s,1h),2.39(s,1h),1.93(d,j＝9.5hz,1h),1.76(dd,j＝10.0,3.9hz,1h),1.60(dd,j＝10.5,3.4hz,1h),1.50(s,2h),1.24(d,j＝5.0hz,1h).核磁共振碳譜：13cnmr(126mhz,cdcl3)δ165.2(d,j＝259.6hz),162.6,159.4,152.5,148.7,148.5,144.4(d,j＝8.7hz),135.5(d,j＝9.6hz),129.4,121.8,116.3,115.6(d,j＝22.7hz),114.5(d,j＝24.0hz),112.6,110.8,106.7,90.8,59.4,55.8,53.4,51.8,47.3,46.2,44.2,33.3,23.2.
實施例4二肽基肽酶-4抑制活性測定
將待測化合物1～3分別用dmso溶解，hepes緩沖液稀釋配制成不同濃度的供試品溶液。實驗分為樣品組(含10μmol·l-1小分子熒光探針四苯基乙烯、5u·l-1dpp-4溶液、10μl待測化合物溶液)、樣品對照組(含10μmol·l-1小分子熒光探針四苯基乙烯、25mg·l-1待測化合物溶液)、對照組(含10μmol·l-1小分子熒光探針四苯基乙烯、5u·l-1dpp-4溶液)、空白組(10μmol·l-1小分子熒光探針四苯基乙烯)，反應溶劑為hepes緩沖液(0.5mmol·l-1,ph7.0)，總反應體積為100μl。陽性對照藥為sitagliptin。37℃孵育30分鐘后，酶標儀檢測各組熒光強度(λex＝320nm，λem＝450nm)，按下式計算各組分對dpp-4的抑制率，其中i表示熒光強度。實驗結果用
表1二肽基肽酶-4抑制率(％)
如圖1-3所示。
試驗結果表明：以上化合物對二肽基肽酶-4表現出顯著的抑制作用，具有潛在的抗2型糖尿病臨床應用前景。
實施例5：化合物1～3注射液的制備
化合物1～3分別用少量的dmso(重量比為：1：0.1-1：0.5，在此為1：0.4)溶解后，按常規加注射用水(重量比為1:20-1:200，在此為1:200)，精濾，灌封滅菌制成注射液。
實施例6：化合物1～3粉針劑的制備
化合物1～3分別用少量的dmso(重量比為：1：0.1-1：0.5，在此為1：0.5)溶解后，將其溶于無菌注射用水(重量比為：1：20-1：60，在此為1:60)中，攪拌使溶解，用無菌抽濾漏斗過濾，再無菌精濾，分裝于安瓿中，低溫冷凍干燥后無菌熔封得粉針劑。
實施例7：化合物1～3粉劑的制備
化合物1～3分別按其與賦形劑重量比為9:1的比例加入賦形劑(重量比，吐溫80:丙二醇:環糊精:乳糖＝1:2:4:12)，制成粉劑。
實施例8：化合物1～3片劑的制備
化合物1～3分別按其與賦形劑(重量比，羥丙甲基纖維素e5：微晶纖維素mcc102:硬脂酸鎂:(8％聚維酮k30)＝15:15:2:0.1)重量比為5:1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例9：化合物1～3口服液的制備
化合物1～3分別加入到含質量濃度20％單糖漿和0.1％苯甲酸鈉的蒸餾水中，按常規口服液制法制成濃度為15μg/ml口服液。
實施例10：化合物1～3膠囊劑的制備
化合物1～3分別按其與賦形劑(重量比，藥用淀粉:葡萄糖:水解明膠:甘氨酸＝30:10:1:1)重量比為5:1的比例混合，制成膠囊。
實施例11：化合物1～3丸劑的制備
化合物1～3分別按其與賦形劑(重量比，peg2000:peg6000＝4:1)重量比為1:10的比例混合，制成丸劑。