本發明屬于熒光檢測，特別涉及一種雙氟硼肼吡咯類熒光探針及其制備方法與β-淀粉樣蛋白檢測應用。
背景技術：
1、阿爾茨海默病（ad）是一種進展緩慢、發病隱匿的慢性神經系統退行性疾病，發病機制復雜。對ad進行早期診斷可盡早干預疾病進展，對于改善ad患者臨床癥狀具有重要的意義。目前，ad的發病機制還沒有明確，有許多可能的機制被提出，其中，淀粉樣蛋白級聯假說是其中的主流被認可的假說之一。該假說認為，細胞外β-淀粉樣蛋白（aβ）異常沉積形成的老年斑是引發ad的關鍵因素之一。aβ由淀粉樣前體蛋白經β-和γ-分泌酶切割產生。app的c端裂解產生兩種類型的aβ肽，最主要的異構體是aβ1-40，其次是aβ1-42。與aβ1-40相比較，aβ1-42疏水性更強，更容易聚集，毒性更強。aβ肽的β-折疊片狀結構傾向于聚集，導致aβ具有多種形式，如aβ單體、aβ寡聚體、aβ纖維體、aβ聚集體等。一般而言，在健康人類的大腦中，aβ的產生和清除是動態平衡的。當這種動態平衡被打破后，aβ將過度產生并在大腦積累，引發神經毒性。有研究表明，aβ過度產生可誘導腦部氧化應激，引發神經炎癥，加速神經元細胞凋亡，加劇ad的發展。因此，高靈敏檢測aβ對于ad早期診斷和延緩發病時間、減輕患者臨床癥狀具有重要意義。
2、目前，用于檢測aβ的熒光探針主要依賴苯并噻唑、bodipy、姜黃素、電子供體-電子受體（d-a）共軛多烯類結構作為熒光母體結構，識別基團主要依賴 n， n-二甲氨基、 n， n-二乙氨基、哌啶基、四氫吡咯基、環己亞胺基等，通過調整共軛雙鍵數目或引入其他共軛基團如噻吩、苯環、呋喃等構建aβ熒光探針。這些傳統探針雖然在一定程度上能夠識別并檢測aβ聚集體，但其靈敏度和選擇性仍存在局限。因此，發展新的熒光母體結構和識別基團，以提高對aβ聚集體的檢測靈敏度和選擇性，具有重要的普適性意義。
技術實現思路
1、針對現有技術中存在的問題，本發明提供一種雙氟硼肼吡咯類熒光探針及其制備方法與β-淀粉樣蛋白檢測應用。
2、本發明是通過如下技術方案實現的：
3、一種雙氟硼肼吡咯類熒光探針，包括熒光母體結構雙氟硼肼吡咯（bophy）和識別基團結構，熒光探針的結構如下：
4、。
5、進一步的，所述雙氟硼肼吡咯類熒光探針為以下化合物中的一種：
6、。
7、本發明還提供了所述雙氟硼肼吡咯類熒光探針的制備方法，包括如下步驟：
8、s1、bophy前體制備：以3，5-二甲基-2-吡咯甲醛與水合肼在乙醇中反應，加入催化量冰乙酸催化縮合，室溫下析出固體，過濾、冰甲醇洗滌，得bophy前體；
9、s2、bophy熒光母體合成：在氮氣保護下，將前體溶于甲苯，于0℃下滴加三乙胺，室溫滴加三氟化硼乙醚，110℃加熱回流；反應后減壓濃縮，經柱層析提純，得bophy熒光母體；
10、s3、目標探針分子合成：將4-氮雜環己基苯甲醛衍生物與bophy溶于甲苯，加入催化量哌啶和對甲苯磺酸，130℃加熱回流；反應結束后，用乙酸乙酯/水萃取，濃縮有機相，柱層析純化，得目標探針分子；
11、。
12、進一步的，所述4-氮雜環己基苯甲醛衍生物為以下化合物中的一種：
13、
14、進一步的，s1中3，5-二甲基-2-吡咯甲醛與水合肼的摩爾比為9：5。
15、進一步的，s2中三乙胺和三氟化硼乙醚的體積比例為2：1.7。
16、進一步的，s3中4-氮雜環己基苯甲醛衍生物和bophy的摩爾比為：3.6：3.1；甲苯、哌啶和對甲苯磺酸的添加比例為10ml：1ml：30?mg。
17、本發明還提供了所述雙氟硼肼吡咯類熒光探針在β-淀粉樣蛋白檢測中的應用。
18、本發明的有益技術效果如下：
19、（1）本發明制備的熒光探針具有較大的斯托克斯位移，可有效降低成像時激發光源對成像效果的干擾。在溶液中對aβ聚集體具有良好的熒光響應和濃度依賴性。
20、（2）本發明提出了一個可用于構建aβ熒光探針的bophy新型熒光母體結構，該結構具有較強的普適性。與bodipy相比，本發明提出的bophy熒光母體結構顯著降低了對bsa蛋白的特異性結合，保證了在復雜腦切片中對aβ精準成像能力。
21、（3）本發明制備的aβ熒光探針中，c-bophy、n-bophy、o-bophy、s-bophy均能夠對aβ聚集體進行靈敏熒光響應，探針n-bophy對aβ聚集體的熒光響應具有最高的信噪比、最佳的識別靈敏度、良好的選擇性和高結合親合力。
22、（4）本發明制備的aβ熒光探針中，c-bophy、n-bophy、o-bophy、s-bophy均能夠對ad小鼠腦切片中的aβ斑塊進行染色成像，其染色結果與商業探針硫磺素-t（tht）具有較高的共定位效果。
1.一種雙氟硼肼吡咯類熒光探針，其特征在于：包括熒光母體結構雙氟硼肼吡咯bophy和識別基團結構，熒光探針的結構如下：
2.根據權利要求1所述的雙氟硼肼吡咯類熒光探針，其特征在于：所述雙氟硼肼吡咯類熒光探針為以下化合物中的一種：
3.一種如權利要求1或2所述的雙氟硼肼吡咯類熒光探針的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：
4.根據權利要求3所述的雙氟硼肼吡咯類熒光探針的制備方法，其特征在于：s1中3，5-二甲基-2-吡咯甲醛與水合肼的摩爾比為9：5。
5.根據權利要求3所述的雙氟硼肼吡咯類熒光探針的制備方法，其特征在于：s2中三乙胺和三氟化硼乙醚的體積比例為2：1.7。
6.根據權利要求3所述的雙氟硼肼吡咯類熒光探針的制備方法，其特征在于：s3中4-氮雜環己基苯甲醛衍生物和bophy的摩爾比為3.6：3.1。
7.?根據權利要求3所述的雙氟硼肼吡咯類熒光探針的制備方法，其特征在于：s3中甲苯、哌啶和對甲苯磺酸的添加比例為10ml：1ml：30?mg。
8.一種如權利要求1或2所述的雙氟硼肼吡咯類熒光探針的在β-淀粉樣蛋白檢測中的應用。