1.本發明涉及一種阻止凡納濱對蝦肝腸孢子蟲垂直傳播的方法,屬于防止水產養殖病害的傳播領域,特別是涉及一種采用陰離子聚丙烯酰胺、聚維酮碘等配制劑防控阻止凡納濱對蝦肝腸孢子蟲垂直傳播的方法。
背景技術:2.凡納濱對蝦是中國常見的水產對蝦養殖種類。凡納濱對蝦的蝦肝腸胞子蟲(英文簡寫為eph)是嚴重危害凡納濱對蝦正常生長的胞子蟲病害,且其繁殖能力極強,用常規方式(酸性或堿性溶液)難以達到在對蝦增養殖環境中對其完全殺滅的目的。
技術實現要素:3.本發明所要解決的技術問題是提供一種阻止凡納濱對蝦肝腸孢子蟲垂直傳播的方法,采用陰離子聚丙烯酰胺、聚維酮碘等配制劑防控對蝦肝腸孢子蟲傳播。
4.為解決上述技術問題,本發明的技術方案為:一種阻止凡納濱對蝦肝腸孢子蟲垂直傳播的方法,其創新點在于包括以下步驟:
5.步驟a:親蝦的選擇與暫養,按照雌雄比為1∶2的比例選擇健康的親蝦,親蝦暫養方法為:將親蝦放入親蝦隔離池,隔離池使用前用ph≥14的naoh溶液浸泡24小時,整個隔離池的用水經過陶氏水處理器,每天按照40%的進行換水,在整個暫養期間水溫控制在28℃,鹽度為28
?
34
‰
,溶氧保證在5mg/l以上,ph8.4
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8.7,水中總氨氮含量低于0.6mg/l,每天按照對蝦體重的2%投喂親蝦飼料,每天投喂4次;
6.步驟b:親蝦的感染與強化:親蝦在隔離池暫養10天后,開始投喂拌有蝦肝腸胞子蟲液的親蝦飼料,拌料的量為10ml/kg,投喂量為體重的2%,連續投喂15天后,經pcr檢測證明為蝦肝腸胞子蟲陽性;取親蝦隔離池親蝦,檢測完隔天剪除親蝦隔離池中母蝦的眼柄,換水量每天換60%,光照強度控制在500x,采用優化后飼料每天投喂量按照親蝦體重的2%計算,每天投喂4次,養殖20天后,親蝦大小達到47
?
60g,母蝦性腺飽滿,公蝦精夾成熟。
7.步驟c:親蝦產卵:親蝦在達到性成熟后,于晚上輕輕把親蝦隔離池中的母蝦性腺成熟的親蝦挑出,檢查是否交配完成,已交配母蝦即母蝦生殖器處有公蝦的精夾并且牢固,放到產卵隔離池,產卵隔離池水為經過陶氏處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,溶解氧5mg/l以上,水中總氨氮為0;未交配的母蝦放回親蝦隔離池的網箱,挑完所有池子中所有性腺飽滿的母蝦后,再拿出網箱,使未授精的母蝦回到親蝦隔離池中,當晚挑出授精合格的母蝦數尾;于晚上從產卵隔離池中輕輕挑出母蝦,親蝦隔離池;
8.步驟d:收集卵子:隔日凌晨用300目的網箱及300目的撈網收集產卵離池中的卵子,將收集到的親蝦卵放于20l的白桶中;白桶中水為經過陶氏水處理器處理的干凈水,水溫29℃,溶解氧5mg/l以上,水中氨氮亞硝酸鹽均為0;在白桶中放置微孔暴氣,調整氣量至微沸騰狀態,用10ml的液移滴管取10ml,放到100ml的燒杯中,燒杯中再加入90ml干凈的超濾水,用1ml玻璃液移管取1ml,計算出液移管中的蝦卵數量,由此可以得知蝦卵數量總共為
280萬
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320萬個;
9.步驟e:洗卵:用500ml的燒杯小心從白桶中取500ml含有蝦的水10杯,隨機分別放置編號為1
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10的清洗系統裝置中的集卵桶,可知每個清洗系統裝置中蝦卵的數量為7萬
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8萬個;清洗系統裝置中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,溶解氧5mg/l以上,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0,水中加入h溶液2ppm,即0.08ml的h試劑,均勻混合;用60目的撈網小心撈出肉眼可見的母蝦糞便及雜質,調節集卵桶中的微孔增氧氣石至微微沸騰的狀態,使蝦卵在該溶液中浸泡2分鐘;2分鐘后往集卵桶中緩緩加入準備好的清洗水,清洗水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.6,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0,使清洗系統裝置內的水邊進邊排,流入的水為清洗桶體積的20倍,合計流入800l的清洗水;清洗完后輕輕拿出集卵桶,把集卵桶里的卵轉移到對應編號1
?
10的孵化桶,孵化桶中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水位為1m,水溫32℃,溶解氧5mg/l以上,水中氨氮亞硝酸鹽均為0,孵化桶中放置一個微孔增氧氣石,氣量調節至微微沸騰狀態;
10.步驟f:洗幼體:隔天中午檢查編號1
?
10的孵化桶內的蝦卵均正常孵化,取編號11
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20的清洗系統裝置放置于孵化桶下方,清洗系統裝置中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在32℃,ph8.6,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0,關掉孵化桶里的微孔增氧氣石,靜置10分鐘;10分鐘后打開集卵桶中的微孔增氧,氣量大小調節至微微沸騰,再打開孵化桶下方的pvc球閥,調整大小使帶有幼體的水流緩緩流入對應的清洗系統裝置中的集卵桶,直至無水流出為止;收集好幼體后,用500ml的燒杯從清洗桶中取500ml的水出來,放0.08ml的h試劑,均勻混合后,倒入即集卵桶,輕輕上下晃動集卵桶,使清洗桶和集卵桶的溶液均勻分布,打開已經準備好的清洗水,使清洗水緩緩流入集卵桶,清洗水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在32℃,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0,使清洗系統裝置內的水邊進邊排,流入的水為清洗桶體積的40倍,合計流入1600l的清洗水;清洗完后,收集編號11
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20的清洗系統裝置里的幼體,送至隔離育苗池,進入常規標準的育苗程序。
11.優選的,所述步驟a中健康的親蝦。所述的健康親蝦為體長16
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18cm、體重為32
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40g、體型大、體色正常、副肢完整、鰓部清潔、無特定病毒感染;所述親蝦暫養方法中按照11
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14尾/m2的密度將親蝦放入親蝦隔離池,且親蝦隔離池的大小為25m2的水泥池,水深0.6m。
12.優選的,所述步驟b中所述蝦肝腸胞子蟲液的制備方法為,在爆發蝦肝腸胞子蟲的養殖池塘取糞便,該蝦池肝腸孢子蟲癥狀明顯,經pcr檢測證明為蝦肝腸胞子蟲陽性,取0.1g爆發蝦肝腸胞子蟲的對蝦糞便放入勻漿器中,加入1ml的lpbs緩沖液并浴研磨均勻,然后將蝦肝腸胞子蟲液置入1.5ml的ep管中3000r/min離心5min,取上清液200ul加入到1800ul的pbs緩沖液,用經高溫消毒過的裝有0.22ul孔目的過濾器過濾,取濾液500ul加入到49.5ml且ph7.4的pbs緩沖液混勻,共計50ml,4℃保存備用。
13.優選的,所述步驟b中優化后飼料為親蝦飼料、沙蟲、魷魚、牛肝等按照1∶3∶1∶1的比例調配。
14.優選的,所述步驟c中所述網箱長寬高為1m*1m*1m,四周用40目的網目圍起來,上下兩面為放空,產卵時保持安靜,關閉所有燈光,提高產卵率。
15.優選的,所述步驟e和步驟f中所述清洗系統裝置包括清洗桶和集卵桶,所述清洗桶為長為40cm,寬為40cm,高為25cm的正方形塑料桶;所述集卵桶為半徑15cm,高為35cm的
圓形塑料桶,在距離桶底10cm處有一塊長方形環形切割,切割的孔洞為長40cm,寬30cm,孔洞中固定一塊250目的濾網。
16.優選的,所述集卵桶使用過程中,所述集卵桶放在所述清洗桶里面,往集卵桶中加水,水會帶著細小糞便、雜質及蝦肝腸胞子蟲從濾網中流出來,且所述集卵桶中放一個微孔增氧氣石,氣量的大小調節至微微沸騰。
17.優選的,所述步驟e和步驟f中所述h試劑為陰離子聚丙烯酰胺、聚維酮碘、純凈水按照1∶5∶10的比例配置。
18.優選的,所述步驟e和步驟f中所述孵化桶為底部半徑25cm,高1.5m的塑料圓桶,桶底裝有32mm口徑的pvc管,出水口裝配球閥跟32mm的塑料軟管15cm,桶內部裝配彎頭與20cm高的32mm口徑的pvc管。
19.優選的,所述步驟e中孵化桶正上方40cm處安裝一盞50w的白熾燈,孵化期間白熾燈保持常亮狀態,孵化桶放置于離地35cm的臺面上。
20.本發明的有益效果為:本發明利用h試劑并結合采用特制的清洗系統裝置,在對蝦育苗初始階段即對該胞子蟲病害進行全面徹底的有效清除,阻斷該胞子蟲病害在對蝦發育生長過程中的垂直傳播,解決凡納濱對蝦增養殖中無法有效防控該胞子蟲病害的難題。
具體實施方式
21.下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述。
22.實施例1
23.1)親蝦的選擇與暫養:按照雌雄比為1∶2的比例選擇健康的親蝦,健康親蝦為體長17cm、體重為36g、體型大、體色正常、副肢完整、鰓部清潔、無特定病毒感染。親蝦暫養方法為:按照12尾/m2的密度將親蝦放入親蝦隔離池,親蝦隔離池的大小為25m2的水泥池,水深0.6m,隔離池使用前用ph≥14的naoh溶液浸泡24小時,整個隔離場的用水經過陶氏水處理器,過濾孔徑為0.1~0.2um,每天按照40%的進行換水,在整個暫養期間水溫控制在28℃,鹽度為28
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34
‰
,溶氧保證在5mg/l以上,ph8.6,水中總氨氮含量低于0.6mg/l,每天按照對蝦體重的2%投喂親蝦飼料,每天投喂4次。
24.2)親蝦的感染與強化:親蝦在隔離場暫養10天后,開始投喂拌有蝦肝腸胞子蟲液的親蝦飼料,拌料的量為10ml/kg,投喂量為體重的2%,連續投喂15天后,取親蝦隔離池親蝦所產出的新鮮糞便,經pcr檢測證明為蝦肝腸胞子蟲陽性。檢測完隔天減除親蝦隔離池中母蝦的眼柄,換水量每天換60%,光照強度控制在500x。將親蝦飼料、沙蟲、魷魚、牛肝等按照1∶3∶1∶1的比例飼喂親蝦。每天投喂量按照親蝦體重的2%計算,每天投喂4次。養殖20天后,親蝦大小達到50g。母蝦性腺飽滿,公蝦精夾成熟。
25.上述的蝦肝腸胞子蟲液的制備方法為:在爆發蝦肝腸胞子蟲的養殖池塘取糞便,該蝦池肝腸孢子蟲癥狀明顯,經pcr檢測證明為蝦肝腸胞子蟲陽性。取0.1g爆發蝦肝腸胞子蟲的對蝦糞便放入勻漿器中,加入1ml的lpbs緩沖液并浴研磨均勻,然后將蝦肝腸胞子蟲液置入1.5ml的ep管中3000r/min離心5min,取上清液200ul加入到1800ul的pbs緩沖液,用經高溫消毒過的裝有0.22ul孔目的過濾器過濾。取濾液500ul加入到49.5ml且ph7.4的pbs緩沖液混勻,共計50ml,4℃保存備用。
26.3)親蝦產卵及收集卵子:親蝦在達到性成熟后,于晚上7點輕輕把親蝦隔離池中的
母蝦性腺成熟的親蝦挑出,檢查是否交配完成,已交配母蝦即母蝦生殖器處有公蝦的精夾并且牢固,放到產卵隔離池,產卵隔離池為水泥池,面積25平方米,水位0.6m,水為經過陶氏處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.6,溶解氧5mg/l以上,水中總氨氮為0。未交配的母蝦放回親蝦隔離池的網箱,挑完所有池子中所有性腺飽滿的母蝦后,再拿出網箱,使未授精的母蝦回到親蝦隔離池中。當晚挑出授精合格的母蝦15尾。網箱長寬高為1m*1m*1m,四周用40目的網目圍起來,上下兩面為放空。產卵時保持安靜,關閉所有燈光,提高產卵率。于晚上12點從產卵隔離池中輕輕挑出母蝦,親蝦隔離池。隔日凌晨1點用300目的網箱及300目的撈網收集產卵離池中的卵子。將收集到的親蝦卵放于20l的白桶中。白桶中水為經過陶氏水處理器處理的干凈水,水溫29℃,ph8.6,溶解氧5mg/l以上,水中氨氮亞硝酸鹽均為0。在白桶中放置微孔暴氣,調整氣量至微沸騰狀態,用10ml的液移滴管取10ml,放到100ml的燒杯中,燒杯中再加入90ml干凈的超濾水,用1ml玻璃液移管取1ml,計算出液移管中的蝦卵數量尾16個,由此可以得知蝦卵數量總共為320萬個。
27.4)洗卵:用500ml的燒杯小心從白桶中取500ml含有蝦的水10杯,隨機分別放置編號為1
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10的清洗系統裝置中的集卵桶,可知每個清洗系統裝置中蝦卵的數量為8萬個。清洗系統裝置中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.6,溶解氧5mg/l以上,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0,水中加入h溶液2ppm,即0.08ml的h試劑,均勻混合。用60目的撈網小心撈出肉眼可見的母蝦糞便及雜質,調節集卵桶中的微孔增氧氣石至微微沸騰的狀態,使蝦卵在該溶液中浸泡2分鐘。2分鐘后,往集卵桶中緩緩加入準備好的清洗水。清洗水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.6,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。使清洗系統裝置內的水邊進邊排,流入的水為清洗桶體積的20倍,合計流入800l的清洗水。清洗完后,輕輕拿出集卵桶,把集卵桶里的卵轉移到對應編號1
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10的孵化桶。孵化桶中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水位為1m,水溫32℃,ph8.6,溶解氧5mg/l以上,水中氨氮亞硝酸鹽均為0。孵化桶中放置一個微孔增氧氣石,氣量調節至微微沸騰狀態。孵化桶正上方40cm處安裝一盞50w的白熾燈,孵化期間白熾燈保持常亮狀態。孵化桶放置于離地35cm的臺面上。
28.上述的h試劑為陰離子聚丙烯酰胺、聚維酮碘、純凈水按照1∶5∶10的比例配置。上述的清洗系統裝置包括兩個部分,第一部分為清洗桶,清洗桶長為40cm,寬為40cm,高為25cm的正方形塑料桶。第二部分為集卵桶,集卵桶半徑15cm,高為35cm的圓形塑料桶,在距離桶底10cm處有一塊長方形環形切割,切割的孔洞為長40cm,寬30cm,孔洞中固定一塊250目的濾網。使用過程中,集卵桶放在清洗桶里面,往集卵桶中加水,水會帶著細小糞便、雜質及蝦肝腸胞子蟲從濾網中流出來。集卵桶中放一個微孔增氧氣石,氣量的大小調節至微微沸騰。上述的孵化桶為底部半徑25cm,高1.5m的塑料圓桶,桶底裝有32mm口徑的pvc管,出水口裝配球閥跟32mm的塑料軟管15cm,桶內部裝配彎頭與20cm高的32mm口徑的pvc管。
29.5)洗幼體:隔天中午12點,檢查編號1
?
10的孵化桶,均正常孵化。取編號11
?
20的清洗系統裝置放置于孵化桶下方。清洗系統裝置中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在32℃,ph8.6,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。孵化桶的放置高于地面35cm的臺面上。關掉孵化桶里的微孔增氧氣石,靜置10分鐘。10分鐘后打開集卵桶中的微孔增氧,氣量大小調節至微微沸騰。再打開孵化桶下方的pvc球閥,調整大小,使帶有幼體的水流緩緩流入對應的清洗系統裝置中的集卵桶,直至無水流出為止。收集好幼體后,用500ml的燒杯
從清洗桶中取500ml的水出來,放0.08ml的h試劑,均勻混合后,倒入即集卵桶,輕輕上下晃動集卵桶,使清洗桶和集卵桶的溶液均勻分布,打開已經準備好的清洗水,使清洗水緩緩流入集卵桶。清洗水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在32℃,ph8.6,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。使清洗系統裝置內的水邊進邊排,流入的水為清洗桶體積的40倍,合計流入1600l的清洗水。清洗完后,收集編號11
?
20的清洗系統裝置里的幼體,送至隔離育苗池,進入常規標準的育苗程序。
30.實施例2
31.1)親蝦的選擇與暫養:按照雌雄比為1∶2的比例選擇健康的親蝦,健康親蝦為體長16cm、體重為32g、體型大、體色正常、副肢完整、鰓部清潔、無特定病毒感染。所述的親蝦暫養方法為:按照14尾/m2的密度將親蝦放入親蝦隔離池,親蝦隔離池的大小為25m2的水泥池,水深0.6m,隔離池使用前用ph≥14的naoh溶液浸泡24小時,整個隔離場的用水經過陶氏水處理器,過濾孔徑為0.1~0.2um,每天按照40%的進行換水,在整個暫養期間水溫控制在28℃,鹽度為28
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34
‰
,溶氧保證在5mg/l以上,ph8.4,水中總氨氮含量低于0.6mg/l。每天按照對蝦體重的2%投喂親蝦飼料,每天投喂4次。
32.2)親蝦的感染與強化:親蝦在隔離場暫養10天后,開始投喂拌有蝦肝腸胞子蟲液的親蝦飼料,拌料的量為10ml/kg,投喂量為體重的2%。連續投喂15天后,取親蝦隔離池親蝦所產出的新鮮糞便,經pcr檢測證明為蝦肝腸胞子蟲陽性。檢測完隔天減除親蝦隔離池中母蝦的眼柄,換水量每天換60%,光照強度控制在500x。將親蝦飼料、沙蟲、魷魚、牛肝等按照1∶3∶1∶1的比例飼喂親蝦。每天投喂量按照親蝦體重的2%計算,每天投喂4次。養殖20天后,親蝦大小達到47g。母蝦性腺飽滿,公蝦精夾成熟。
33.上述的蝦肝腸胞子蟲液的制備方法為:在爆發蝦肝腸胞子蟲的養殖池塘取糞便,該蝦池肝腸孢子蟲癥狀明顯,經pcr檢測證明為蝦肝腸胞子蟲陽性。取0.1g爆發蝦肝腸胞子蟲的對蝦糞便放入勻漿器中,迅速加入1ml的lpbs緩沖液并浴研磨均勻,然后將蝦肝腸胞子蟲液置入1.5ml的ep管中3000r/min離心5min,取上清液200ul加入到1800ul的pbs緩沖液,用經高溫消毒過的裝有0.22ul孔目的過濾器過濾。取濾液500ul加入到49.5ml且ph7.4的pbs緩沖液混勻,共計50ml,4℃保存備用。
34.3)親蝦產卵及收集卵子:親蝦在達到性成熟后,于晚上7點輕輕把親蝦隔離池中的母蝦性腺成熟的親蝦挑出,檢查是否交配完成,已交配母蝦即母蝦生殖器處有公蝦的精夾并且牢固,放到產卵隔離池,產卵隔離池為水泥池,面積25平方米,水位0.6m,水為經過陶氏處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.4,溶解氧5mg/l以上,水中總氨氮為0。未交配的母蝦放回親蝦隔離池的網箱,挑完所有池子中所有性腺飽滿的母蝦后,再拿出網箱,使未授精的母蝦回到親蝦隔離池中。當晚挑出授精合格的母蝦17尾。所述網箱長寬高為1m*1m*1m,四周用40目的網目圍起來,上下兩面為放空。產卵時保持安靜,關閉所有燈光,提高產卵率。于晚上12點從產卵隔離池中輕輕挑出母蝦,親蝦隔離池。隔日凌晨1點用300目的網箱及300目的撈網收集產卵離池中的卵子。將收集到的親蝦卵放于20l的白桶中。白桶中水為經過陶氏水處理器處理的干凈水,水溫29℃,ph8.6,溶解氧5mg/l以上,水中氨氮亞硝酸鹽均為0。在白桶中放置微孔暴氣,調整氣量至微沸騰狀態,用10ml的液移滴管取10ml,放到100ml的燒杯中,燒杯中再加入90ml干凈的超濾水,用1ml玻璃液移管取1ml,計算出液移管中的蝦卵數量尾13個,由此可以得知蝦卵數量總共為280萬個。
35.4)洗卵:用500ml的燒杯小心從白桶中取500ml含有蝦的水10杯,隨機分別放置編號為1
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10的清洗系統裝置中的集卵桶,可知每個清洗系統裝置中蝦卵的數量為7萬個。清洗桶中清洗系統裝置包扣清洗桶和集卵桶。清洗系統裝置中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.4,溶解氧5mg/l以上,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0,水中加入h溶液2ppm,即0.08ml的h試劑,均勻混合。用60目的撈網小心撈出肉眼可見的母蝦糞便及雜質,調節集卵桶中的微孔增氧氣石至微微沸騰的狀態,使蝦卵在該溶液中浸泡2分鐘。2分鐘后,往集卵桶中緩緩加入準備好的清洗水。清洗水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.4,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。使清洗系統裝置內的水邊進邊排,流入的水為清洗桶體積的20倍,合計流入800l的清洗水。清洗完后,輕輕拿出集卵桶,把集卵桶里的卵轉移到對應編號1
?
10的孵化桶。孵化桶中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水位為1m,水溫32℃,ph8.4,溶解氧5mg/l以上,水中氨氮亞硝酸鹽均為0。孵化桶中放置一個微孔增氧氣石,氣量調節至微微沸騰狀態。孵化桶正上方40cm處安裝一盞50w的白熾燈,孵化期間白熾燈保持常亮狀態。孵化桶放置于離地35cm的臺面上。
36.上述的h試劑為:陰離子聚丙烯酰胺、聚維酮碘、純凈水按照1∶5∶10的比例配置。上述的清洗系統裝置包括兩個部分,第一部分為清洗桶,清洗桶長為40cm,寬為40cm,高為25cm的正方形塑料桶。第二部分為集卵桶,集卵桶半徑15cm,高為35cm的圓形塑料桶,在距離桶底10cm處有一塊長方形環形切割,切割的孔洞為長40cm,寬30cm,孔洞中固定一塊250目的濾網。使用過程中,集卵桶放在清洗桶里面,往集卵桶中加水,水會帶著細小糞便、雜質及蝦肝腸胞子蟲從濾網中流出來。集卵桶中放一個微孔增氧氣石,氣量的大小調節至微微沸騰。上述的孵化桶為底部半徑25cm,高1.5m的塑料圓桶,桶底裝有32mm口徑的pvc管,出水口裝配球閥跟32mm的塑料軟管15cm,桶內部裝配彎頭與20cm高的32mm口徑的pvc管。
37.5)洗幼體:隔天中午12點,檢查編號1
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10的孵化桶,均正常孵化。取編號11
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20的清洗系統裝置放置于孵化桶下方。清洗系統裝置中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在32℃,ph8.6,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。孵化桶的放置高于地面35cm的臺面上。關掉孵化桶里的微孔增氧氣石,靜置10分鐘。10分鐘后打開集卵桶中的微孔增氧,氣量大小調節至微微沸騰。再打開孵化桶下方的pvc球閥,調整大小,使帶有幼體的水流緩緩流入對應的清洗系統裝置中的集卵桶,直至無水流出為止。收集好幼體后,用500ml的燒杯從清洗桶中取500ml的水出來,放0.08ml的h試劑,均勻混合后,倒入即集卵桶,輕輕上下晃動集卵桶,使清洗桶和集卵桶的溶液均勻分布,打開已經準備好的清洗水,使清洗水緩緩流入集卵桶。清洗水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在32℃,ph8.4,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。使清洗系統裝置內的水邊進邊排,流入的水為清洗桶體積的40倍,合計流入1600l的清洗水。清洗完后,收集編號11
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20的清洗系統裝置里的幼體,送至隔離育苗池,進入常規標準的育苗程序。
38.實施例3
39.1)親蝦的選擇與暫養:按照雌雄比為1∶2的比例選擇健康的親蝦,健康親蝦為體長18cm、體重為40g、體型大、體色正常、副肢完整、鰓部清潔、無特定病毒感染。親蝦暫養方法為:按照11尾/m2的密度將親蝦放入親蝦隔離池,親蝦隔離池的大小為25m2的水泥池,水深0.6m,隔離池使用前用ph≥14的naoh溶液浸泡24小時,整個隔離場的用水經過陶氏水處理器,過濾孔徑為0.1~0.2um,每天按照40%的進行換水,在整個暫養期間水溫控制在28℃,
鹽度為28
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,溶氧保證在5mg/l以上,ph8.7,水中總氨氮含量低于0.6mg/l。每天按照對蝦體重的2%投喂親蝦飼料,每天投喂4次。
40.2)親蝦的感染與強化:親蝦在隔離場暫養10天后,開始投喂拌有蝦肝腸胞子蟲液的親蝦飼料,拌料的量為10ml/kg,投喂量為體重的2%。連續投喂15天后,取親蝦隔離池親蝦所產出的新鮮糞便,經pcr檢測證明為蝦肝腸胞子蟲陽性。檢測完隔天減除親蝦隔離池中母蝦的眼柄,換水量每天換60%,光照強度控制在500x。將親蝦飼料、沙蟲、魷魚、牛肝等按照1∶3∶1∶1的比例飼喂親蝦。每天投喂量按照親蝦體重的2%計算,每天投喂4次。養殖20天后,親蝦大小達到60g。母蝦性腺飽滿,公蝦精夾成熟。
41.上述的蝦肝腸胞子蟲液的制備方法為:在爆發蝦肝腸胞子蟲的養殖池塘取糞便,該蝦池肝腸孢子蟲癥狀明顯,經pcr檢測證明為蝦肝腸胞子蟲陽性。取0.1g爆發蝦肝腸胞子蟲的對蝦糞便放入勻漿器中,迅速加入1ml的lpbs緩沖液并浴研磨均勻,然后將蝦肝腸胞子蟲液置入1.5ml的ep管中3000r/min離心5min,取上清液200ul加入到1800ul的pbs緩沖液,用經高溫消毒過的裝有0.22ul孔目的過濾器過濾。取濾液500ul加入到49.5ml且ph7.4的pbs緩沖液混勻,共計50ml,4℃保存備用。
42.3)親蝦產卵及收集卵子:親蝦在達到性成熟后,于晚上7點輕輕把親蝦隔離池中的母蝦性腺成熟的親蝦挑出,檢查是否交配完成,已交配母蝦即母蝦生殖器處有公蝦的精夾并且牢固,放到產卵隔離池,產卵隔離池為水泥池,面積25平方米,水位0.6m,水為經過陶氏處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.7,溶解氧5mg/l以上,水中總氨氮為0。未交配的母蝦放回親蝦隔離池的網箱,挑完所有池子中所有性腺飽滿的母蝦后,再拿出網箱,使未授精的母蝦回到親蝦隔離池中。當晚挑出授精合格的母蝦11尾。所述網箱長寬高為1m*1m*1m,四周用40目的網目圍起來,上下兩面為放空。產卵時保持安靜,關閉所有燈光,提高產卵率。于晚上12點從產卵隔離池中輕輕挑出母蝦,親蝦隔離池。隔日凌晨1點用300目的網箱及300目的撈網收集產卵離池中的卵子。將收集到的親蝦卵放于20l的白桶中。白桶中水為經過陶氏水處理器處理的干凈水,水溫29℃,ph8.6,溶解氧5mg/l以上,水中氨氮亞硝酸鹽均為0。在白桶中放置微孔暴氣,調整氣量至微沸騰狀態,用10ml的液移滴管取10ml,放到100ml的燒杯中,燒杯中再加入90ml干凈的超濾水,用1ml玻璃液移管取1ml,計算出液移管中的蝦卵數量尾13個,由此可以得知蝦卵數量總共為300萬個。
43.4)洗卵:用500ml的燒杯小心從白桶中取500ml含有蝦的水10杯,隨機分別放置編號為1
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10的清洗系統裝置中的集卵桶,可知每個清洗系統裝置中蝦卵的數量為75000個。清洗桶中清洗系統裝置包扣清洗桶和集卵桶。清洗系統裝置中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.7,溶解氧5mg/l以上,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0,水中加入h溶液2ppm,即0.08ml的h試劑,均勻混合。用60目的撈網小心撈出肉眼可見的母蝦糞便及雜質,調節集卵桶中的微孔增氧氣石至微微沸騰的狀態,使蝦卵在該溶液中浸泡2分鐘。2分鐘后,往集卵桶中緩緩加入準備好的清洗水。清洗水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在29℃,ph8.7,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。使清洗系統裝置內的水邊進邊排,流入的水為清洗桶體積的20倍,合計流入800l的清洗水。清洗完后,輕輕拿出集卵桶,把集卵桶里的卵轉移到對應編號1
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10的孵化桶。孵化桶中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水位為1m,水溫32℃,ph8.4,溶解氧5mg/l以上,水中氨氮亞硝酸鹽均為0。孵化桶中放置一個微孔增氧氣石,氣量調節至微微沸騰狀態。孵化桶正上方40cm處安裝一盞50w的白熾
燈,孵化期間白熾燈保持常亮狀態。孵化桶放置于離地35cm的臺面上。
44.上述的h試劑為:陰離子聚丙烯酰胺、聚維酮碘、純凈水按照1∶5∶10的比例配置。上述的清洗系統裝置包括兩個部分,第一部分為清洗桶,清洗桶長為40cm,寬為40cm,高為25cm的正方形塑料桶。第二部分為集卵桶,集卵桶半徑15cm,高為35cm的圓形塑料桶,在距離桶底10cm處有一塊長方形環形切割,切割的孔洞為長40cm,寬30cm,孔洞中固定一塊250目的濾網。使用過程中,集卵桶放在清洗桶里面,往集卵桶中加水,水會帶著細小糞便、雜質及蝦肝腸胞子蟲從濾網中流出來。集卵桶中放一個微孔增氧氣石,氣量的大小調節至微微沸騰。上述的孵化桶為底部半徑25cm,高1.5m的塑料圓桶,桶底裝有32mm口徑的pvc管,出水口裝配球閥跟32mm的塑料軟管15cm,桶內部裝配彎頭與20cm高的32mm口徑的pvc管。
45.5)洗幼體:隔天中午12點,檢查編號1
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10的孵化桶,均正常孵化。取編號11
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20的清洗系統裝置放置于孵化桶下方。清洗系統裝置中的水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在32℃,ph8.7,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。孵化桶的放置高于地面35cm的臺面上。關掉孵化桶里的微孔增氧氣石,靜置10分鐘。10分鐘后打開集卵桶中的微孔增氧,氣量大小調節至微微沸騰。再打開孵化桶下方的pvc球閥,調整大小,使帶有幼體的水流緩緩流入對應的清洗系統裝置中的集卵桶,直至無水流出為止。收集好幼體后,用500ml的燒杯從清洗桶中取500ml的水出來,放0.08ml的h試劑,均勻混合后,倒入即集卵桶,輕輕上下晃動集卵桶,使清洗桶和集卵桶的溶液均勻分布,打開已經準備好的清洗水,使清洗水緩緩流入集卵桶。清洗水為經過陶氏水處理器處理過的干凈水,水溫控制在32℃,ph8.7,水中總氨氮亞硝酸鹽均為0。使清洗系統裝置內的水邊進邊排,流入的水為清洗桶體積的40倍,合計流入1600l的清洗水。清洗完后,收集編號11
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20的清洗系統裝置里的幼體,送至隔離育苗池,進入常規標準的育苗程序。
46.以上所述,僅為本發明專利的具體實施方式,但本發明專利的保護范圍并不局限于此,任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明專利所公開的范圍內,根據本發明專利的技術方案及其構思加以等同替換或改變,都屬于本發明專利的保護范圍。