本發(fā)明涉及一種用于使用獨(dú)立縮合劑生產(chǎn)肽化合物的方法。
背景技術(shù)：
1、最近，已發(fā)現(xiàn)通過使用非天然氨基酸諸如環(huán)肽提高了肽的代謝穩(wěn)定性和膜滲透性（非專利文獻(xiàn)?1?和?2）。特別地，其中，已提出含有n-取代的氨基酸的環(huán)肽化合物具有類藥性諸如代謝穩(wěn)定性和膜滲透性，并且可用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的抑制劑的產(chǎn)生（專利文獻(xiàn)?1、非專利文獻(xiàn)?3）。
2、由于肽化合物已作為藥物引起注意，因此也已認(rèn)為用于生產(chǎn)肽化合物的方法是重要的（非專利文獻(xiàn)?4）。通常通過延長(zhǎng)肽鏈（通過重復(fù)連接氨基酸的?c?末端的羧基至另一個(gè)氨基酸或肽的?n?末端的氨基的步驟）進(jìn)行肽化合物的合成。用于延長(zhǎng)肽鏈的方法的已知實(shí)例包括使用?hopo（2-羥基吡啶-n-氧化物）作為添加劑的方法（非專利文獻(xiàn)?5）、使用?oxyma（2-氰基-2-(羥基亞氨基)乙酸乙酯）的方法（非專利文獻(xiàn)?6）和使用?hopo?和?oxyma?兩種類型作為添加劑并使用碳二亞胺作為縮合劑的方法（專利文獻(xiàn)?2）。還知曉使用?tptu?作為縮合劑和?hobt?作為添加劑的方法（非專利文獻(xiàn)?7）。
3、另一種已知的延長(zhǎng)肽鏈的方法是稱為片段偶聯(lián)的方法，該方法使各自由多個(gè)氨基酸殘基組成的肽片段經(jīng)受連接彼此的酰胺鍵形成反應(yīng)。片段偶聯(lián)方法具有最終產(chǎn)物的高總收率的優(yōu)勢(shì)。所需肽化合物中的氨基酸殘基的數(shù)量越多，優(yōu)勢(shì)越大。然而，在常規(guī)的酰胺鍵形成條件下，由氨基酸殘基的?α-位的外消旋化造成的雜質(zhì)的增加和導(dǎo)致的目標(biāo)產(chǎn)物的收率和純度的降低顯著增加純化的難度，導(dǎo)致生產(chǎn)涉及的時(shí)間和精力的增加。此外，當(dāng)?n-末端或?c-末端為?n-取代的氨基酸并且其成為片段偶聯(lián)中的酰胺鍵形成反應(yīng)的反應(yīng)點(diǎn)時(shí)，反應(yīng)性的降低已是問題（非專利文獻(xiàn)?8）。因此，當(dāng)合成含有?n-取代的氨基酸的肽化合物時(shí)，已限制合成方法為使氨基酸按每次一個(gè)殘基的方式依次經(jīng)受酰胺鍵形成反應(yīng)的方法或用不引起差向異構(gòu)化的殘基進(jìn)行的片段偶聯(lián)的方法。
4、引文列表
5、專利文獻(xiàn)
6、專利文獻(xiàn)?1?國(guó)際公開號(hào)?wo?2013/100132
7、專利文獻(xiàn)?2?國(guó)際公開號(hào)?wo?2023/117904
8、非專利文獻(xiàn)
9、非專利文獻(xiàn)?1?acc.?chem.?res.?2008,?41,?1331-1342。
10、非專利文獻(xiàn)?2?angew.?chem.?int.?ed.,?2013,?52,?254-269。
11、非專利文獻(xiàn)?3?chem.?rev.,?2019,?119,?10360-10391。
12、非專利文獻(xiàn)?4?amino?acids,?peptides?and?proteins?in?organic?chemistry:building?blocks,?catalysis?and?coupling?chemistry,?volume?3,?2011。
13、非專利文獻(xiàn)?5?tetrahedron?letters.,?2020,?152299。
14、非專利文獻(xiàn)?6?tetrahedron?letters.,?2021,?153462。
15、非專利文獻(xiàn)?7?tetrahedron?letters.,?1989,?11927。
16、非專利文獻(xiàn)?8?j.?peptide?res.,?2005,?65,?153-166。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、技術(shù)問題
2、鑒于此類情況做出了本發(fā)明。在一個(gè)方面中，要解決的問題是建立一種用于肽化合物的新合成方法。在一個(gè)方面中，要解決的問題是建立一種適用于肽化合物的片段偶聯(lián)的新合成方法。在一個(gè)方面中，要解決的問題是建立一種合成方法，其中構(gòu)成肽化合物的所有氨基酸殘基即使通過片段偶聯(lián)也保持高非對(duì)映選擇性。在一個(gè)方面中，要解決的問題是建立一種用于即使通過片段偶聯(lián)也以高非對(duì)映選擇性和高收率合成肽化合物的方法。在一個(gè)方面中，要解決的問題是建立一種用于通過片段偶聯(lián)以高收率合成肽化合物，同時(shí)防止反應(yīng)底物的羧基的?α-碳處的外消旋化的方法。在一個(gè)方面中，要解決的問題是建立一種適用于片段偶聯(lián)在?n-末端或?c-末端含有?n-取代的氨基酸的肽化合物的合成方法。在一個(gè)方面中，要解決的問題是建立一種適用于片段偶聯(lián)肽化合物的合成方法，其中用烷基取代結(jié)合至反應(yīng)底物的羧基的?α-碳的氮原子。
3、問題的解決方案
4、本發(fā)明人已深入研究以解決上述問題。因此，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)一種通過在獨(dú)立縮合劑和一種或多種添加劑存在的反應(yīng)體系中進(jìn)行酰胺鍵形成反應(yīng)解決以上問題中的至少一者的方法。此外，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)可以抑制縮合反應(yīng)中副產(chǎn)物的產(chǎn)生的反應(yīng)條件。
5、在一個(gè)具體的非限制性方面中，本發(fā)明涵蓋以下內(nèi)容。
6、[1]?一種用于生產(chǎn)肽化合物或其鹽的方法，該方法包括用酰胺鍵連接第一氨基酸或肽的氨基與第二氨基酸或肽的羧基的步驟（連接步驟），其中在該連接步驟中使用獨(dú)立縮合劑和一種或多種添加劑，并且該添加劑為選自由?2-羥基吡啶-n-氧化物?(hopo)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑?(hoat)、3,4-二氫-3-羥基-4-氧代-苯并三嗪?(hoobt)、1-羥基-1h-1,2,3-三唑-4-甲酸乙酯?(hoct)、2,2,3,3,3-五氟-1-丙醇?(pfpoh)、2-氰基-2-(羥基亞氨基)乙酸乙酯?(oxyma)、5-(羥基亞氨基)-1,3-二甲基嘧啶-2,4,6-(1h,3h,5h)-三酮(oxyma-b)、n-羥基琥珀酰亞胺?(hosu)?和?(羥基亞氨基)氰基乙酸乙酯鉀鹽?(k-oxyma)組成的組的一者或多者。
7、[1-1]?根據(jù)?[1]?所述的方法，其中該添加劑為選自由?hopo、hoat、hoobt、hoct、oxyma、oxyma-b?和?hosu?組成的組的一者或多者。
8、[1-2]?根據(jù)?[1-1]?所述的方法，其中該添加劑為選自由?hopo、hoat、hoobt、hoct、oxyma、oxyma-b?和?hosu?組成的組的一者。
9、[2]?根據(jù)?[1]?所述的方法，其中該獨(dú)立縮合劑在分子中具有由以下式?(1)?至(4)?中的任一者表示的結(jié)構(gòu)：
10、[式?1]
11、
12、[式?2]
13、
14、[式?3]
15、
16、其中?r4?為?ch?或?n，
17、[式?4]
18、。
19、[2-2]?根據(jù)?[1]?或?[2]?所述的方法，其中該獨(dú)立縮合劑在分子中具有由以下式(5)?至?(7)?中的任一者表示的結(jié)構(gòu)：
20、[式?5]
21、
22、[式?6]
23、
24、[式?7]
25、。
26、[3]?根據(jù)?[1]?所述的方法，其中該獨(dú)立縮合劑為選自由?2-氰基-2-((二甲基亞氨基)(嗎啉基)甲基肟基)乙酸乙酯六氟磷酸鹽?(comu)、1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓?3-氧化物六氟磷酸鹽?(hatu)、o-[(乙氧基羰基)氰基亞甲基氨基]-n,n,n',n'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽?(hotu)、o-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基)-n,n,n',n'-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽?(tdbtu)、3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮?(depbt)、o-[2-氧代-1(2h)-吡啶基]-n,n,n',n'-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽?(tptu)、2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸鹽?(bep)?和亞水楊基氨基-2-苯硫酚?(ph2cp)組成的組的至少一者。
27、[4]?根據(jù)?[3]?所述的方法，其中該獨(dú)立縮合劑為選自由?comu、hatu、hotu、depbt、tptu?和?tdbtu?組成的組的至少一者。
28、[4-1]?根據(jù)?[4]?所述的方法，其中該獨(dú)立縮合劑為選自由?comu、hatu、hotu、depbt?和?tdbtu?組成的組的至少一者。
29、[5]?根據(jù)?[1]?至?[4]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中以相對(duì)于該第一氨基酸或肽0.5?至?5.0?摩爾當(dāng)量使用該獨(dú)立縮合劑。
30、[6]?根據(jù)?[1]?至?[5]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該獨(dú)立縮合劑為選自由?comu、hatu、hotu、depbt?和?tdbtu?組成的組的至少一者，并且該添加劑為?hopo。
31、[7]?根據(jù)?[1]?至?[6]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中以相對(duì)于該第一氨基酸或肽0.1?至?5.0?摩爾當(dāng)量使用該一種或多種添加劑。
32、[8]?根據(jù)?[1]?至?[7]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第二氨基酸或肽為含有兩種或更多種氨基酸殘基的肽。
33、[9]?根據(jù)?[1]?至?[8]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中含有位于該第二氨基酸或肽的羧基的?β?位的氮原子的氨基由式：-nr5-?表示，其中?r5?為氫原子、直鏈?c1-c6?烷基、支鏈c3-c6?烷基或?c3-c8?環(huán)烷基。
34、[10]?根據(jù)?[1]?至?[9]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中含有位于該第二氨基酸或肽的羧基的?β?位的氮原子的氨基由式：-nr5-?表示，其中?r5?為氫原子或直鏈?c1-c4?烷基。
35、[10-1]?根據(jù)?[1]?至?[10]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中含有位于該第二氨基酸或肽的羧基的?β-位的氮原子的氨基由式：-nr5-?表示，其中?r5?為氫原子、甲基或乙基。
36、[11]?根據(jù)?[1]?至?[10-1]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中含有位于該第二氨基酸或肽的羧基的?β?位的氮原子的氨基由式：-nr5-?表示，其中?r5?為氫原子或甲基。
37、[12]?根據(jù)?[1]?至?[11]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第一氨基酸或肽為含有兩種或更多種氨基酸殘基的肽。
38、[13]?根據(jù)?[1]?至?[12]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為氫原子、直鏈?c1-c6?烷基、支鏈c3-c6?烷基或?c3-c8?環(huán)烷基。
39、[14]?根據(jù)?[1]?至?[13]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7-?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為氫原子或直鏈?c1-c4?烷基。
40、[15]?根據(jù)?[1]?至?[14]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為氫原子、甲基或乙基。
41、[16]?根據(jù)?[1]?至?[15]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7-?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為氫原子或甲基。
42、[17]?根據(jù)?[1]?至?[16]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為甲基。
43、[18]?根據(jù)?[1]?至?[17]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第二氨基酸或肽的羧基的α-碳由式：-cr8r9-?表示，其中?r8?和?r9?相同或不同并且各自為氫原子、任選地經(jīng)取代的直鏈?c1-c4?烷基、任選地經(jīng)取代的支鏈?c3-c6?烷基、任選地經(jīng)取代的?c1-c4?烷氧基-c1-c2烷基、直鏈?c2-c6?烯基、任選地經(jīng)取代的苯基?c1-c2?烷基或任選地經(jīng)取代的?5?元至?6?元雜芳基?c1-c2?烷基。
44、[19]?根據(jù)?[1]?至?[18]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第二氨基酸或肽的羧基的α-碳由式：-cr8r9-?表示，其中?r8?和?r9?相同或不同并且各自為氫原子、直鏈?c1-c3?烷基、異丙基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、叔丁氧基甲基、2-丙烯基或任選地經(jīng)取代的芐基。
45、[20]?根據(jù)?[1]?至?[19]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該第二氨基酸或肽的羧基的α-碳由式：-cr8r9-?表示，其中?r8?為氫原子，并且?r9?為氫原子、甲基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、叔丁氧基甲基、2-丙烯基、芐基、對(duì)甲基芐基或?qū)ΨS基。
46、[21]?根據(jù)?[1]?至?[20]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中保護(hù)該第一氨基酸或肽的羧基。
47、[22]?根據(jù)?[1]?至?[21]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中保護(hù)該第二氨基酸或肽的氨基。
48、[23]?根據(jù)?[1]?至?[22]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中在該連接步驟中使用堿。
49、[24]?根據(jù)?[23]?所述的方法，其中在該連接步驟中使用的該堿的共軛酸的?pka在?0?至?15.0?之間，更優(yōu)選地在?3?至?13.0?之間，并且進(jìn)一步優(yōu)選地在?5?至?11.5?之間。
50、[24-1]?根據(jù)?[24]?所述的方法，其中該?pka?是作為當(dāng)使用?25℃的水作為溶劑時(shí)的?pka?的測(cè)量值。
51、[25]?根據(jù)?[23]?或?[24]?所述的方法，其中在該連接步驟中使用的該堿為有機(jī)堿。
52、[26]?根據(jù)?[23]?至?[25]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中在該連接步驟中使用的該堿為選自由二環(huán)己基甲胺、二異丙基乙胺、三乙胺、n-甲基嗎啉、4-n,n-二甲基氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶和?2,4,6-三甲基吡啶組成的組的至少一者。
53、[26-1]?根據(jù)?[23]?至?[26]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中在該連接步驟中使用的該堿為二環(huán)己基甲胺或二異丙基乙胺。
54、[27]?根據(jù)?[1]?至?[26]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過液相合成進(jìn)行該連接步驟。
55、[28]?根據(jù)?[27]?所述的方法，其中在有機(jī)溶劑中進(jìn)行該液相合成。
56、[29]?根據(jù)?[28]?所述的方法，其中在該連接步驟中使用的該有機(jī)溶劑為選自由乙腈、乙酸異丙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲基叔丁基醚、乙醚、二氯甲烷、四氫呋喃、2-甲基四氫呋喃、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n-甲基吡咯烷酮、二甲基亞砜和甲苯或其混合溶劑組成的組的至少一者。
57、[30]?根據(jù)?[29]?所述的方法，其中在該連接步驟中使用的該有機(jī)溶劑為選自由乙腈、乙酸異丙酯、甲基叔丁基醚、二氯甲烷、2-甲基四氫呋喃、n,n-二甲基甲酰胺和甲苯或其混合溶劑組成的組的至少一者。
58、[30-1]?根據(jù)?[30]?所述的方法，其中在該連接步驟中使用的該有機(jī)溶劑為選自由乙腈、乙酸異丙酯和?2-甲基四氫呋喃或其混合溶劑組成的組的至少一者。
59、[31]?根據(jù)?[1]?至?[30]?中任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括脫保護(hù)步驟。
60、[32]?根據(jù)?[1]?至?[31]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中重復(fù)該連接步驟兩次或更多次。
61、[33]?根據(jù)?[1]?至?[32]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中生產(chǎn)的該肽化合物或其鹽含有?8?至?20?個(gè)氨基酸殘基。
62、[34]?根據(jù)?[1]?至?[33]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中生產(chǎn)的該肽化合物或其鹽含有?11?至?14?個(gè)氨基酸殘基。
63、[35]?根據(jù)?[1]?至?[34]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中生產(chǎn)的該肽化合物含有至少一個(gè)非天然氨基酸殘基。
64、[36]?根據(jù)?[1]?至?[35]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中生產(chǎn)的該肽化合物含有至少四個(gè)非天然氨基酸殘基。
65、[37]?根據(jù)?[1]?至?[36]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中生產(chǎn)的該肽化合物含有至少五個(gè)非天然氨基酸殘基。
66、[38]?根據(jù)?[35]?至?[37]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中該非天然氨基酸為?n-甲基氨基酸殘基。
67、[39]?根據(jù)?[1]?至?[38]?中任一項(xiàng)所述的方法，其中生產(chǎn)的該肽化合物或其鹽含有由?4?個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的環(huán)狀部分，并且其中在該環(huán)狀部分中在?1?至?7?個(gè)位置含有用其連接該第一氨基酸或肽的氨基與該第二氨基酸或肽的羧基的酰胺鍵。
68、[40]?根據(jù)?[1]?至?[39]?中任一項(xiàng)所述的方法，其使用流動(dòng)反應(yīng)裝置進(jìn)行。
69、[41]?一種肽化合物或其鹽，其通過根據(jù)?[1]?至?[40]?中任一項(xiàng)所述的方法生產(chǎn)。
70、[42]?一種藥物組合物，其包含通過根據(jù)?[1]?至?[40]?中任一項(xiàng)所述的方法生產(chǎn)的肽化合物或其鹽。
71、[43]?一種連接劑，其包含獨(dú)立縮合劑和一種或多種添加劑，用于用酰胺鍵連接第一氨基酸或肽的氨基與第二氨基酸或肽的羧基的步驟。
72、[44]?根據(jù)?[43]?所述的連接劑，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為氫原子、直鏈?c1-c6?烷基、支鏈?c3-c6?烷基或c3-c8?環(huán)烷基，并且該第二氨基酸或肽的羧基的?α-碳由式：-cr8r9-?表示，其中?r8?和?r9相同或不同并且各自為氫原子、任選地經(jīng)取代的直鏈?c1-c4?烷基、任選地經(jīng)取代的支鏈c3-c6?烷基、任選地經(jīng)取代的?c1-c4?烷氧基-c1-c2?烷基、直鏈?c2-c6?烯基、任選地經(jīng)取代的苯基?c1-c2?烷基或任選地經(jīng)取代的?5?元至?6?元雜芳基?c1-c2?烷基。
73、[45]?根據(jù)?[44]?所述的連接劑，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7-表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為氫原子或直鏈?c1-c4?烷基。
74、[46]?根據(jù)?[44]?至?[45]?中任一項(xiàng)所述的連接劑，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為氫原子、甲基或乙基。
75、[47]?根據(jù)?[44]?至?[46]?中任一項(xiàng)所述的連接劑，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7-?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為氫原子或甲基。
76、[48]?根據(jù)?[44]?至?[47]?中任一項(xiàng)所述的連接劑，其中該第一氨基酸或肽的氨基為由式：-nr6r7?表示的氨基，其中?r6?為氫原子，并且?r7?為甲基。
77、[49]?根據(jù)?[44]?至?[48]?中任一項(xiàng)所述的連接劑，其中該第二氨基酸或肽的羧基的?α-碳由式：-cr8r9-?表示，其中?r8?和?r9?相同或不同并且各自為氫原子、直鏈?c1-c3烷基、異丙基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、叔丁氧基甲基、2-丙烯基或任選地經(jīng)取代的芐基。
78、[50]?根據(jù)?[44]?至?[49]?中任一項(xiàng)所述的連接劑，其中該第二氨基酸或肽的羧基的?α-碳由式：-cr8r9-?表示，其中?r8?為氫原子，并且?r9?為氫原子、甲基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、叔丁氧基甲基、2-丙烯基、芐基、對(duì)甲基芐基或?qū)ΨS基。
79、在上述編號(hào)中，除非另有說(shuō)明，從屬項(xiàng)中引用的編號(hào)包括該編號(hào)的分支編號(hào)。例如，從屬項(xiàng)中引用的?[1]?示出不僅包括?[1]，還包括其分支編號(hào)?[1-1]。其他編號(hào)也同樣如此。
80、發(fā)明的有益效果
81、根據(jù)本發(fā)明，即使通過片段偶聯(lián)也可以以高非對(duì)映選擇性和高收率合成肽化合物。