本發明涉及一種臍帶血來源血管內皮祖細胞以及包括該祖細胞的用于預防或治療缺血性疾病的組合物，更具體地，涉及一種表現出特異表面抗原特性的高純度的臍帶血來源血管內皮祖細胞、通過對臍帶血進行前處理的臍帶血來源血管內皮祖細胞的獲取方法以及包括所述臍帶血來源血管內皮祖細胞的用于預防和治療缺血性疾病的組合物。
背景技術：
1、心臟疾病、腦血管疾病、末梢血管性疾病等的缺血性疾病具有高的患病率和死亡率，通過現有的內科治療法、介入治療法、外科治療法無法得到充足的效果的情況較多。由于這些理由，需要通過促進血管生成來改善缺血組織的血流的新的治療法。
2、血管內皮祖細胞（epc：endothelial?progenitor?cells）具有促進血管生成的能力，這些細胞可以來源于骨髓、外周血、臍帶血等。尤其，臍帶血容易獲得，免疫排斥反應少，倫理問題也比較少，因此評價為適合細胞治療的資源。血管內皮祖細胞表達作為血管內皮細胞標記物的cd34、cd144、cd184等，這些細胞通過向受損的血管部位移動而起到幫助血管再生的作用。
3、在現有的研究中，已經提出了利用血管內皮祖細胞的多種細胞治療法，但是大部分的研究在細胞純度和增殖能力上存在問題，并且由于在細胞的獲取過程中使用的培養條件、生長因子、附著用基質等無法形成最優化，因此在臨床應用中存在困難。
4、另外，據報道，血液中的肝素在人體中的半衰期在1~2小時以內，肝素的活性通過與血液中存在的許多蛋白質的結合而迅速喪失（semin?intervent?radiol?2010?dec;?27(4):?360-367）。據報道，肝素與血液中的細胞因子及生長因子蛋白質之間（j?cell?molmed.?2018.?pmid:?30334335）的結合和解離受溫度影響（biochem?physiol.?2018.），并且作為與這些蛋白質之間的相互作用的結果，也可能影響血液ecfc或后期增殖血管內皮祖細胞的細胞功能，由此可知，不僅是具有與肝素結合可能性的蛋白質的數量相當多，而且肝素與蛋白質之間的結合的結果顯示對細胞存在影響，因此具有非常復雜的相關關系（stemcell?res?2014?may;12(3):703-15）。
技術實現思路
1、技術問題
2、據此，為了獲取臨床上可應用的高純度血管內皮祖細胞，本發明人經努力研究的結果發現，如果用肝素處理臍帶血來分離并獲取單核細胞，并在特定條件下培養該單核細胞，則可以獲得表現出特異表面抗原特性的高純度血管內皮祖細胞，從而完成了本發明。
3、本發明的一目的在于提供一種臍帶血來源血管內皮祖細胞以及該祖細胞的獲取方法和包括所述臍帶血來源血管內皮祖細胞的用于預防或治療缺血性疾病的組合物。
4、技術方案
5、本發明提供一種至少50%以上的細胞群表達cd34標記物且至少小于5%的所述細胞群表達cd90標記物的臍帶血來源血管內皮祖細胞。
6、在所述臍帶血來源血管內皮祖細胞中，至少80%以上的所述細胞群可以表達cd34標記物。
7、在所述臍帶血來源血管內皮祖細胞中，至少80%以上的所述細胞群可以表達cd144標記物及cd184標記物。
8、所述臍帶血來源血管內皮祖細胞可以是被培養至少10代以上的臍帶血來源血管內皮祖細胞。
9、所述臍帶血來源血管內皮祖細胞可以增加選自angpt2、mcp-1、mmp-1及pigf中的一種以上的血管形成刺激因子的表達。
10、并且，本發明提供一種包括所述臍帶血來源血管內皮祖細胞作為有效成分的用于預防或治療缺血性疾病的細胞治療劑組合物。
11、并且，本發明提供一種臍帶血來源血管內皮祖細胞的獲取方法，其特征在于，包括如下步驟：通過用肝素處理臍帶血來從所述臍帶血分離并獲取單核細胞；以及將所述單核細胞在包括巖藻聚糖、橄欖苦苷及血管內皮生長因子作為有效成分的培養基中進行培養，從而獲取臍帶血來源血管內皮祖細胞。
12、所述肝素可以以1~1000u/1ml臍帶血的濃度進行處理。
13、所述肝素的處理可以在1~20℃下進行1~8小時。
14、還可以包括如下步驟：通過對獲取的所述臍帶血來源血管內皮祖細胞中表達cd34標記物的臍帶血來源血管內皮祖細胞進行傳代培養，從而最終獲取高純度臍帶血來源血管內皮祖細胞。
15、有益效果
16、本發明的高純度臍帶血來源血管內皮祖細胞表現出集落形成以及高的增殖能力和高的體內血管生成潛在力，從而可以對由血管的收縮或閉塞而誘發的多種缺血性疾病的預防或治療表現出優異的效果。
17、并且，本發明可以通過在特性條件下的肝素處理而將臍帶血來源血管內皮祖細胞的集落確保為充足的數量，從而可以有助于細胞治療劑的大量生產等。
1.一種臍帶血來源血管內皮祖細胞，其特征在于，
2.根據權利要求1所述的臍帶血來源血管內皮祖細胞，其特征在于，
3.根據權利要求1所述的臍帶血來源血管內皮祖細胞，其特征在于，
4.根據權利要求1所述的臍帶血來源血管內皮祖細胞，其特征在于，
5.根據權利要求1所述的臍帶血來源血管內皮祖細胞，其特征在于，
6.一種用于預防或治療缺血性疾病的細胞治療劑組合物，包括選自權利要求1至權利要求5中的任一項所述的臍帶血來源血管內皮祖細胞作為有效成分。
7.一種臍帶血來源血管內皮祖細胞的獲取方法，其特征在于，包括如下步驟：
8.根據權利要求7所述的臍帶血來源血管內皮祖細胞的獲取方法，其特征在于，
9.根據權利要求7所述的臍帶血來源血管內皮祖細胞的獲取方法，其特征在于，
10.根據權利要求7所述的臍帶血來源血管內皮祖細胞的獲取方法，其特征在于，還包括如下步驟：