本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖病害檢測(cè)，具體涉及一種基于水體病毒載量與魚(yú)體組織病毒載量相關(guān)性的石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒無(wú)損檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
1、石斑魚(yú)作為中國(guó)乃至全球重要的高經(jīng)濟(jì)價(jià)值海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)，其產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展長(zhǎng)期受到各種病害的嚴(yán)重威脅。其中，由神經(jīng)壞死病毒（nervous?necrosis?virus，nnv）引起的病毒性神經(jīng)壞死病（viral?nervous?necrosis，vnn）是危害最為嚴(yán)重的疾病之一，尤其對(duì)石斑魚(yú)的魚(yú)苗和幼魚(yú)階段具有極高的致病率和死亡率，死亡率可高達(dá)100%，給養(yǎng)殖業(yè)者造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
2、目前，針對(duì)神經(jīng)壞死病毒的檢測(cè)技術(shù)主要分為傳統(tǒng)方法和現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)。傳統(tǒng)方法如組織病理學(xué)觀察，需要解剖魚(yú)體制作病理切片，過(guò)程繁瑣且時(shí)效性差。現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)特別是實(shí)時(shí)熒光定量pcr（rt-qpcr），雖然具有極高的靈敏度和特異性，能夠精確地定量病毒載量，但其實(shí)施前提仍然是從魚(yú)體獲取組織樣本，例如魚(yú)苗的腦組織或眼球、親魚(yú)的性腺組織等。
3、然而，現(xiàn)有所有主流檢測(cè)方法，無(wú)論其技術(shù)原理如何，都面臨一個(gè)共同的、難以克服的缺陷—有損檢測(cè)。取樣過(guò)程必然對(duì)被檢測(cè)的動(dòng)物個(gè)體造成不可逆的機(jī)械損傷，輕則引起應(yīng)激、降低免疫力、誘發(fā)二次感染，重則直接導(dǎo)致個(gè)體死亡。對(duì)于價(jià)值高昂的親本（如用于spf，即無(wú)特定病原，苗種繁育的親魚(yú)）而言，損傷性檢測(cè)是不可接受的。對(duì)于大規(guī)模的魚(yú)苗或商品魚(yú)養(yǎng)殖，隨機(jī)抽樣檢測(cè)不僅存在代表性不足的問(wèn)題，而且頻繁的抽樣會(huì)顯著增加養(yǎng)殖成本和死亡率。因此，養(yǎng)殖者往往只有在觀察到明顯的臨床癥狀或出現(xiàn)大規(guī)模死亡事件時(shí)，才能確認(rèn)疫情的發(fā)生，此時(shí)已錯(cuò)過(guò)了最佳的防控窗口期，造成無(wú)可挽回的損失。因此，市場(chǎng)和產(chǎn)業(yè)界迫切需要一種全新的、非侵入性的、無(wú)損的病毒監(jiān)測(cè)技術(shù)，它應(yīng)能夠低成本、高頻率地對(duì)整個(gè)養(yǎng)殖群體進(jìn)行健康評(píng)估，實(shí)現(xiàn)疾病的早期發(fā)現(xiàn)和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警，從而指導(dǎo)養(yǎng)殖者采取及時(shí)的、精準(zhǔn)的防控措施。
4、研究表明，許多水生病原體（包括病毒）在感染宿主后，會(huì)通過(guò)排泄物、分泌物或死亡個(gè)體分解等途徑被釋放到周?chē)乃w環(huán)境中。這意味著養(yǎng)殖水體中可能包含著反映養(yǎng)殖動(dòng)物群體健康狀況的“核酸分子”。然而，如何從復(fù)雜的水體環(huán)境中有效捕獲這些痕量病毒信息，并將其與宿主動(dòng)物的感染水平精確地關(guān)聯(lián)起來(lái)，一直是本領(lǐng)域未能有效解決的技術(shù)難題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有魚(yú)類(lèi)病毒檢測(cè)方法特別是石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒檢測(cè)方法依賴(lài)于對(duì)動(dòng)物活體取樣，造成創(chuàng)傷、成本高且無(wú)法進(jìn)行高頻監(jiān)測(cè)的技術(shù)問(wèn)題。為解決這一技術(shù)問(wèn)題，克服現(xiàn)有技術(shù)不足，本發(fā)明基于神經(jīng)壞死病毒可以通過(guò)水體在魚(yú)體之間進(jìn)行水平傳播，通過(guò)優(yōu)化養(yǎng)殖水體中神經(jīng)壞死病毒的濃縮條件，實(shí)現(xiàn)水體病毒載量的高效濃縮與定量，再結(jié)合水體-魚(yú)體病毒載量相關(guān)性模型，間接且無(wú)損的評(píng)估魚(yú)體神經(jīng)壞死病毒感染狀態(tài)，從而解決現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)存在的創(chuàng)傷性取樣、檢測(cè)成本高、無(wú)法實(shí)現(xiàn)早期預(yù)警與動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的問(wèn)題。
2、本發(fā)明首先保護(hù)一種檢測(cè)待測(cè)水體樣品中目標(biāo)病毒載量的方法，依次可包括如下步驟：
3、（1）向待測(cè)水體樣品中加入fecl3進(jìn)行絮凝，之后用聚醚砜膜對(duì)絮凝后的水樣進(jìn)行抽濾，收集濾膜上的濃縮物，即病毒濃縮物；
4、（2）完成步驟（1）后，釋放病毒濃縮物中的病毒核酸，得到回收樣本；
5、（3）檢測(cè)回收樣本中目標(biāo)病毒載量，進(jìn)而獲得待測(cè)水體樣品中目標(biāo)病毒載量。
6、上述方法中，所述步驟（1）中，所述fecl3作為絮凝劑的濃度為0.8-1.2mg/l（如0.8-1.0mg/l、1.0-1.2mg/l、0.8mg/l、1.0mg/l或1.2mg/l）。
7、上述方法中，所述步驟（1）中，所述絮凝的條件為280-320rpm（如280-300rpm、300-320rpm、280rpm、300rpm或320rpm）攪拌0.5-1.5h（如0.5-1.0h、1.0-1.5h、0.5h、1.0h或1.5h）。
8、上述方法中，所述步驟（1）中，所述聚醚砜膜孔徑具體可為0.80μm。
9、上述方法中，所述步驟（2）中，釋放病毒濃縮物中的病毒核酸的方法可為向病毒濃縮物中加入裂解液和/或鋼珠，之后研磨破碎。
10、所述裂解液可為rna裂解液。
11、所述研磨破碎可采用高通量組織研磨儀破碎。
12、上述方法還可包括目標(biāo)病毒定性的步驟，該步驟可在進(jìn)行步驟（2）后、進(jìn)行步驟（3）前進(jìn)行。所述目標(biāo)病毒定性的步驟可為：以回收樣本的cdna為模板，采用用于擴(kuò)增目標(biāo)病毒特異序列的引物對(duì)進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物；之后進(jìn)行如下判定：如果pcr擴(kuò)增產(chǎn)物中含有目標(biāo)病毒特異序列，則待測(cè)水體樣品含有目標(biāo)病毒；否則待測(cè)水體樣品不含有目標(biāo)病毒。如果待測(cè)水體樣品含有目標(biāo)病毒，則進(jìn)行步驟（3）的定量步驟。
13、上述方法中，所述步驟（3）中，檢測(cè)回收樣本中目標(biāo)病毒載量的步驟可依次如下：
14、（a1）將目標(biāo)病毒特異dna片段插入載體，得到重組載體；
15、（a2）以不同濃度重組載體的稀釋液為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量pcr，獲得ct值；
16、（a3）以重組載體中目標(biāo)病毒的拷貝數(shù)或其對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，ct值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
17、（a4）以回收樣本的cdna為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量pcr，獲得ct值；將該ct值代入步驟（a3）繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回收樣本中目標(biāo)病毒載量。
18、上述任一所述的方法中，所述待測(cè)水體樣品可為養(yǎng)殖水體樣品。進(jìn)一步的，所述養(yǎng)殖水體樣品可為成魚(yú)養(yǎng)殖水、魚(yú)苗育苗水或其它養(yǎng)殖物種的水體。進(jìn)一步的，所述其它養(yǎng)殖物種可為蝦或貝類(lèi)。
19、上述任一所述的方法中，所述目標(biāo)病毒可為可以在養(yǎng)殖水體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物之間水平傳播的病毒。所述可以在養(yǎng)殖水體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物之間水平傳播的病毒可為神經(jīng)壞死病毒。進(jìn)一步的，所述神經(jīng)壞死病毒可為赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒。
20、上述任一所述的方法中，當(dāng)目標(biāo)病毒為赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒時(shí)，所述重組載體可為將核苷酸序列如seq?id?no.1所示的第二輪pcr擴(kuò)增產(chǎn)物克隆至pmd19-t載體得到的重組質(zhì)粒。所述進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量時(shí)，使用的引物可為引物rna2?for：5’-caactgacarcgahcacac-3’和引物rna2?rev：5’-cccaccayttggcvac-3’，探針可為taqman探針：5’-6fam-tycargcractcgtggtgcvg-bhq1-3’。所述標(biāo)準(zhǔn)曲線可為y=-2.5191x+39.942，r2=0.9902。
21、上述任一所述的方法在監(jiān)測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的病毒感染狀態(tài)中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
22、上述應(yīng)用中，所述病毒可為可以在養(yǎng)殖水體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物之間水平傳播的病毒。進(jìn)一步的，所述可以在養(yǎng)殖水體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物之間水平傳播的病毒可為神經(jīng)壞死病毒。進(jìn)一步的，所述神經(jīng)壞死病毒可為赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒。
23、上述應(yīng)用中，所述水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物可為魚(yú)類(lèi)、蝦或貝類(lèi)。進(jìn)一步的，所述魚(yú)類(lèi)可為石斑魚(yú)或東星斑。
24、本發(fā)明還保護(hù)一種無(wú)損監(jiān)測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的目標(biāo)病毒感染狀態(tài)的方法，可包括如下步驟：
25、s1、取水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物所在的養(yǎng)殖水體，之后采用上述任一所述方法檢測(cè)所述養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量；
26、s2、將所述養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量輸入至經(jīng)訓(xùn)練的人工智能模型，得到水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物組織中目標(biāo)病毒載量作為輸出值，根據(jù)輸出值監(jiān)測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的目標(biāo)病毒感染狀態(tài)；
27、所述人工智能模型是以感染目標(biāo)病毒的水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的重量、長(zhǎng)度、組織中目標(biāo)病毒載量和養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量通過(guò)多元線性回歸分析得到的；其中養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量為因變量，感染目標(biāo)病毒的水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的重量、長(zhǎng)度和組織中目標(biāo)病毒載量為自變量。
28、上述方法中，所述將所述養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量輸入至經(jīng)訓(xùn)練的人工智能模型具體可為將所述養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量、水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的重量和長(zhǎng)度輸入至經(jīng)訓(xùn)練的人工智能模型。
29、上述方法中，所述水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物組織中目標(biāo)病毒載量具體可為水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物腦組織和眼組織中目標(biāo)病毒載量。
30、上述方法中，進(jìn)一步的，所述水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物可為魚(yú)類(lèi)、蝦或貝類(lèi)。進(jìn)一步的，所述魚(yú)類(lèi)可為石斑魚(yú)或東星斑。
31、上述方法中，進(jìn)一步的，所述目標(biāo)病毒可為可以在養(yǎng)殖水體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物之間水平傳播的病毒。進(jìn)一步的，所述可以在養(yǎng)殖水體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物之間水平傳播的病毒可為神經(jīng)壞死病毒。進(jìn)一步的，所述神經(jīng)壞死病毒可為赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒。
32、上述方法中，進(jìn)一步的，所述養(yǎng)殖水體可為成魚(yú)養(yǎng)殖水、魚(yú)苗育苗水或其它養(yǎng)殖物種的水體。進(jìn)一步的，其它養(yǎng)殖物種為蝦或貝類(lèi)。
33、上述任一所述的方法或上述任一所述的應(yīng)用均用于非疾病的診斷與治療。由于可以高頻率、低成本地進(jìn)行監(jiān)測(cè)，因此上述任一所述的方法或上述任一所述的應(yīng)用可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的早期預(yù)警，其能夠在病毒感染初期、水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物尚未表現(xiàn)出臨床癥狀時(shí)，通過(guò)水體中病毒載量的微小變化捕捉到感染信號(hào)。
34、本發(fā)明還保護(hù)一種無(wú)損監(jiān)測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的目標(biāo)病毒感染狀態(tài)的數(shù)據(jù)處理裝置。所述無(wú)損監(jiān)測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的目標(biāo)病毒感染狀態(tài)的數(shù)據(jù)處理裝置，其可包括存儲(chǔ)器、處理器以及存儲(chǔ)在存儲(chǔ)器上的計(jì)算機(jī)程序。其中，所述處理器執(zhí)行所述計(jì)算機(jī)程序以實(shí)現(xiàn)如下步驟：p1、數(shù)據(jù)接收：接收水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物所在的養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量，得到樣本數(shù)據(jù)；p2、數(shù)據(jù)處理：將所述樣本數(shù)據(jù)輸入至經(jīng)訓(xùn)練的人工智能模型，得到水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物組織中目標(biāo)病毒載量作為輸出值，根據(jù)輸出值監(jiān)測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的目標(biāo)病毒感染狀態(tài)；所述人工智能模型是以感染目標(biāo)病毒的水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的重量、長(zhǎng)度、組織中目標(biāo)病毒載量和養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量通過(guò)多元線性回歸分析得到的；其中養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量為因變量，感染目標(biāo)病毒的水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的重量、長(zhǎng)度和組織中目標(biāo)病毒載量為自變量。
35、上述數(shù)據(jù)處理裝置中，所述“接收水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物所在的養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量，得到樣本數(shù)據(jù)”具體可為接收水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物所在的養(yǎng)殖水體中目標(biāo)病毒載量、水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的重量和長(zhǎng)度，得到樣本數(shù)據(jù)。
36、上述數(shù)據(jù)處理裝置中，所述水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物組織中目標(biāo)病毒載量具體可為水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物腦組織和眼組織中目標(biāo)病毒載量。
37、上述數(shù)據(jù)處理裝置中，進(jìn)一步的，所述水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物可為魚(yú)類(lèi)、蝦或貝類(lèi)。進(jìn)一步的，所述魚(yú)類(lèi)可為石斑魚(yú)或東星斑。
38、上述數(shù)據(jù)處理裝置中，進(jìn)一步的，所述目標(biāo)病毒可以在養(yǎng)殖水體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物之間水平傳播的病毒。進(jìn)一步的，所述可以在養(yǎng)殖水體在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物之間水平傳播的病毒可為神經(jīng)壞死病毒。進(jìn)一步的，所述神經(jīng)壞死病毒可為赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒。
39、上述數(shù)據(jù)處理裝置中，進(jìn)一步的，所述養(yǎng)殖水體可為成魚(yú)養(yǎng)殖水、魚(yú)苗育苗水或其它養(yǎng)殖物種的水體。進(jìn)一步的，其它養(yǎng)殖物種為蝦或貝類(lèi)。
40、在具體實(shí)施方式中，所述數(shù)據(jù)處理裝置為計(jì)算機(jī)裝置。
41、本技術(shù)還提供了一種計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)。
42、本技術(shù)所提供的計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)，其上存儲(chǔ)有計(jì)算機(jī)程序，所述計(jì)算機(jī)程序被處理器執(zhí)行時(shí)實(shí)現(xiàn)所述方法的步驟。
43、在一些實(shí)施方式中，計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)為“非瞬時(shí)”或“非暫時(shí)”的。
44、本技術(shù)還提供了一種計(jì)算機(jī)程序（產(chǎn)品）。
45、本技術(shù)所提供的計(jì)算機(jī)程序（產(chǎn)品），包括計(jì)算機(jī)程序，該計(jì)算機(jī)程序被處理器執(zhí)行時(shí)實(shí)現(xiàn)所述方法的步驟。
46、上文所述計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品可為主要通過(guò)計(jì)算機(jī)程序?qū)崿F(xiàn)其解決方案的軟件產(chǎn)品。
47、所述計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)是指存儲(chǔ)數(shù)據(jù)的載體，可為磁帶、磁盤(pán)、軟盤(pán)、光盤(pán)、磁光盤(pán)、rom、prom、vcd、dvd、硬盤(pán)、閃存、u盤(pán)、cf卡、sd卡、mmc卡、sm卡、記憶棒(memory?stick)或xd卡等。
48、本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明白，上述的本發(fā)明的各步驟可以用通用的計(jì)算裝置來(lái)實(shí)現(xiàn)，它們可以集中在單個(gè)的計(jì)算裝置上，或者分布在多個(gè)計(jì)算裝置所組成的網(wǎng)絡(luò)上，可選地，它們可以用計(jì)算裝置可執(zhí)行的程序代碼來(lái)實(shí)現(xiàn)，從而，可以將它們存儲(chǔ)在存儲(chǔ)裝置中由計(jì)算裝置來(lái)執(zhí)行，并且在某些情況下，可以以不同于此處的順序執(zhí)行所述步驟，或者將它們分別制作成各個(gè)集成電路模塊，或者將它們中的多個(gè)步驟制作成單個(gè)集成電路模塊來(lái)實(shí)現(xiàn)。這樣，本發(fā)明不限制于任何特定的硬件和軟件結(jié)合。
49、這里提到的通用計(jì)算裝置一般包含處理器和存儲(chǔ)器，存儲(chǔ)器用于存儲(chǔ)指令，當(dāng)指令被處理器執(zhí)行時(shí)，使得該計(jì)算裝置執(zhí)行“本發(fā)明的各步驟”。
50、上述任一所述人工智能模型具體可為實(shí)施例記載的通過(guò)人工感染實(shí)驗(yàn)，積累了大量養(yǎng)殖水體神經(jīng)壞死病毒拷貝數(shù)與魚(yú)體組織病毒拷貝數(shù)的原始建模數(shù)據(jù)，據(jù)此構(gòu)建了能夠定量表征水體與魚(yú)體病毒載量關(guān)聯(lián)的多元線性回歸模型：=40996.057+400.102x1+0.002x2+0.01x3+1777.580x4；其中為養(yǎng)殖水體rgnnv病毒的拷貝數(shù)，x1為魚(yú)體組織重量，x2為魚(yú)眼組織rgnnv病毒的拷貝數(shù)，x3為魚(yú)腦組織rgnnv病毒的拷貝數(shù)，x4為魚(yú)體長(zhǎng)度。據(jù)此，僅需檢測(cè)養(yǎng)殖水體中rgnnv病毒的拷貝數(shù)并代入該模型，即可間接估算魚(yú)體組織（尤其是腦組織和眼組織）rgnnv病毒的拷貝數(shù)。
51、本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：（1）無(wú)損檢測(cè)性；本發(fā)明提供的方法整個(gè)檢測(cè)過(guò)程僅需采集養(yǎng)殖水體，完全避免了對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物本身的任何接觸和傷害，從根本上解決了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的創(chuàng)傷性問(wèn)題；（2）早期預(yù)警；由于可以高頻率、低成本地進(jìn)行監(jiān)測(cè)，因此本發(fā)明能夠在病毒感染初期、水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物尚未表現(xiàn)出臨床癥狀時(shí)，通過(guò)水體中病毒載量的微小變化捕捉到感染信號(hào)，將預(yù)警時(shí)間點(diǎn)大幅提前，為采取有效防控措施贏得寶貴時(shí)間；（3）群體代表性；檢測(cè)養(yǎng)殖水體樣本相當(dāng)于對(duì)整個(gè)養(yǎng)殖環(huán)境中的病毒進(jìn)行“綜合采樣”，其結(jié)果能夠更好地反映整個(gè)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物群體的平均感染狀況，克服了傳統(tǒng)小批量抽樣的代表性偏差問(wèn)題；（4）低成本與易操作性；相較于對(duì)大量水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物進(jìn)行解剖取樣，采集水樣更為簡(jiǎn)便、快速，大大降低了人力和物力成本，使得常態(tài)化監(jiān)測(cè)在經(jīng)濟(jì)上和操作上都成為可能；（5）應(yīng)用廣泛；本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)原理具有普適性，不僅適用于石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒的檢測(cè)，通過(guò)替換檢測(cè)靶標(biāo)和調(diào)整相關(guān)性模型，其理論和流程可以推廣應(yīng)用于其他水產(chǎn)養(yǎng)殖物種（如蝦、貝類(lèi)）和其他病毒性或細(xì)菌性病原體的監(jiān)測(cè)。由此可見(jiàn)，本發(fā)明摒棄了傳統(tǒng)必須損傷魚(yú)體取樣的方式，創(chuàng)新性地通過(guò)檢測(cè)養(yǎng)殖環(huán)境水體的病毒載量來(lái)間接評(píng)估魚(yú)體感染狀態(tài)，同時(shí)本發(fā)明明確了適用于養(yǎng)殖水體中神經(jīng)壞死病毒濃縮的最優(yōu)技術(shù)組合—采用fecl3作為絮凝劑，搭配0.8μm聚醚砜膜進(jìn)行病毒回收，并建立了配套的富集濃縮流程，該流程對(duì)rgnnv病毒滴度為1×103-1×104tcid50/ml的加標(biāo)水樣的病毒回收率可達(dá)58.98±4.56%，最低檢測(cè)限為20.1?copies/ml。本發(fā)明還建立并驗(yàn)證了石斑魚(yú)組織（尤其是腦組織）神經(jīng)壞死病毒載量與養(yǎng)殖水體神經(jīng)壞死病毒載量之間的定量數(shù)學(xué)關(guān)系模型，實(shí)現(xiàn)了從環(huán)境數(shù)據(jù)到生物體內(nèi)狀態(tài)的定量預(yù)測(cè)。
52、本發(fā)明通過(guò)檢測(cè)水體環(huán)境替代檢測(cè)動(dòng)物本身，實(shí)現(xiàn)了對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物群體健康狀況的無(wú)損、動(dòng)態(tài)、早期預(yù)警監(jiān)測(cè)，具有成本低、操作簡(jiǎn)便、可頻繁實(shí)施等優(yōu)點(diǎn)，在水產(chǎn)病害防控、良種選育和生物安全管理中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明提供的方法具有重要的應(yīng)用前景。