背景技術：
1、抗體藥物偶聯物(adc)已成為諸如腫瘤學、感染性疾病和免疫學適應癥的領域的新的一類生物治療劑。adc通常包含經由化學鍵(即接頭)共價附接的抗原靶向性單克隆抗體(mab)和至少一個有效負載(例如，藥物或其他活性劑)。大多數adc依賴于化學方法以將接頭和有效負載(例如，藥物或其他活性劑)附接至抗體的殘基(諸如賴氨酸基團或半胱氨酸基團)。adc產生中涉及的化學過程(process)生成試劑、溶劑、反應副產物(byproduct)、側產物(side?product)和通常與傳統mab產生無關聯的其他小分子雜質的混合物。已知一些雜質(諸如殘留游離藥物、殘留藥物接頭和殘留接頭)可能特別難以使用各種技術(諸如常規超濾/滲濾(uf/df)過程)從adc有效去除。
2、uf/df是對生物制藥產品進行純化和緩沖液交換的常用方法。如圖1和圖2所示，uf/df過程通常涉及將水性緩沖液中包含的粗產物通過膜連續過濾，同時添加交換介質，其方式使得期望產物由膜保留在滲余物室中，而將較小的化合物(例如不需要的溶劑、反應中間體、殘留試劑、副產物、側產物和/或其他雜質)在濾液中被去除。
3、盡管uf/df已被證明可有效地從某些類別的生物制藥產品中去除較小的化合物或雜質，但在某些情況下，uf/df在去除某些雜質方面不是特別有效。例如，如上所述，使用常規uf/df技術可能難以去除與adc和其他綴合物的合成相關聯的一些殘留游離藥物、殘留藥物-接頭、殘留接頭、副產物和/或側產物。理論上，常規uf/df在去除某些雜質方面不是有效的，這是由于雜質和期望產物之間可能形成的非共價鍵形成和/或其他非共價相互作用——從而阻止這些雜質從期望產物中被過濾掉。當uf/df用于純化一些抗體藥物綴合物(adc)，例如基于喜樹堿的adc和喜樹堿衍生物的adc，諸如基于依喜替康(exatecan)的adc時，該技術挑戰可能尤其成問題。
4、需要發現新的分離方法，以用于從抗體藥物綴合物和其他綴合物中去除小分子雜質(諸如與綴合物化合物的合成相關聯的殘留游離藥物、殘留藥物-接頭、殘留接頭和/或副產物)。令人驚訝的是，本公開的uf/df方法解決了這一需求。
技術實現思路
1、本文提供了純化方法，其在去除有機雜質(例如，殘留游離藥物化合物、殘留藥物-接頭化合物、殘留接頭化合物、反應副產物、殘留側產物和/或其組合)中，包括難以使用常規水性uf/df過程去除的產物結合的雜質中高度有效。
2、在一個實施方案中，本發明提供了純化方法，其包括：
3、(a)使包含至少一種綴合物化合物和至少一種雜質的樣品經受有機超濾/滲濾(uf/df)過程(process)，使得樣品通過半透膜過濾，該半透膜具有在將至少一種綴合物化合物保留作為滲余物的情況下允許至少一種雜質穿過(pass?through)半透膜的孔徑，其中有機uf/df過程使用第一交換介質并產生包含至少一種綴合物化合物的滲余物；和
4、(b)使(a)的滲余物產物經受水性uf/df過程，使得其通過半透膜過濾，該半透膜具有在將綴合物化合物保留在滲余物中的情況下允許至少一種雜質穿過半透膜的孔徑，其中水性uf/df過程使用第二交換介質并導致包含至少一種綴合物化合物的滲余物，
5、其中：
6、至少一種雜質包括殘留游離藥物化合物、殘留藥物-接頭化合物、殘留接頭化合物、殘留副產物化合物、殘留側產物化合物或其任何組合；
7、第一交換介質包含至少一種有機溶劑和第一緩沖體系；并且
8、第一交換介質和第二交換介質不同。
9、在一些實施方案中，提供了包括以下步驟的純化方法：(a)將第一交換介質與粗制組合物組合以獲得粗制混合物，其中粗制組合物包含綴合物化合物和至少一種雜質；(b)使粗制混合物經受有機uf/df過程，使得粗制混合物通過第一半透膜過濾，該第一半透膜具有在將綴合物化合物保留在第一滲余物中的情況下允許雜質穿過膜進入第一濾液中的第一孔徑，并且從粗制混合物中過濾的液體體積至少部分地用額外的第一交換介質替換在第一滲余物中，以獲得分離的組合物；和(c)使分離的組合物經受水性超濾/滲濾過程，使得分離的組合物通過第二半透膜過濾，該第二半透膜具有在將綴合物化合物保留在第二滲余物中的情況下允許雜質穿過膜的第二孔徑，并且從分離的組合物過濾的液體體積至少部分地用包含第二緩沖體系的第二交換介質替換，以獲得在第二滲余物中的純化的組合物，其中第一交換介質包含至少一種有機溶劑和第一緩沖體系，并且其中第一交換介質和第二交換介質不同，并且其中雜質可以包括殘留游離藥物化合物、殘留藥物-接頭化合物、殘留接頭化合物、殘留副產物化合物、殘留側產物化合物，或其任何組合。
10、在一些實施方案中，綴合物化合物包含抗體藥物綴合物(adc)。在其他實施方案中，綴合物化合物包含除adc以外的綴合物。因此，本發明也可以應用于非抗體藥物綴合物。
11、令人驚訝地發現，向第一交換介質中添加至少一種有機溶劑使得本發明的方法能夠更有效地去除使用常規uf/df和/或tff過程不能有效去除的小分子雜質(例如，殘留游離藥物化合物、殘留藥物接頭化合物、殘留接頭化合物、殘留副產物化合物等)。因此，本發明中使用的第一交換介質將包含至少一種有機溶劑。如實施例1-6所例示，本發明的方法可以用于從adc和其他綴合物中有效地去除小分子雜質，諸如殘留藥物化合物和藥物-接頭化合物。
12、在一些實施方案中，分離的組合物基本上不含小分子雜質，諸如產物結合的雜質。在一些實施方案中，純化的組合物基本上不含小分子雜質(例如，產物結合的雜質)和有機溶劑。在一些實施方案中，從本發明的純化方法產生的分離的組合物缺乏存在于adc中的接頭的游離接頭形式。在一些實施方案中，純化的藥物綴合物將不包含雜質或者僅包含處于對施用于受試者不顯著的水平的雜質。
13、在一些實施方案中，提供了使用單獨制備的藥物-接頭化合物制備純化的綴合物化合物的方法，其包括以下步驟：(i)通過使靶向劑與還原劑接觸來還原靶向劑以獲得粗制還原的靶向劑；(ii)將還原的靶向劑與藥物-接頭化合物綴合以獲得包含綴合化合物的粗制組合物；(iii)任選地將猝滅劑添加至粗制組合物；和(iv)使用本公開的uf/df方法純化粗制組合物，其中第一交換介質包含至少一種有機溶劑，以獲得純化的綴合物化合物。在一些實施方案中，靶向劑是抗體。在一些實施方案中，靶向劑包含非抗體支架。
14、在一些實施方案中，提供了使用單獨制備的藥物-接頭化合物制備純化的綴合物化合物的方法，其包括以下步驟：
15、(i)通過使靶向劑與還原劑接觸來還原靶向劑以獲得還原的靶向劑；
16、(ii)將還原的靶向劑與藥物-接頭化合物綴合以獲得包含含有綴合物的綴合化合物的粗制組合物；和
17、(iii)使用本公開的uf/df方法純化粗制組合物，其中第一交換介質包含至少一種有機溶劑。在一些實施方案中，靶向劑是抗體。在一些實施方案中，靶向劑包含非抗體支架。
18、在一些實施方案中，提供了通過連接基團和藥物化合物的序貫附接來制備純化的綴合物化合物的方法，其包括以下步驟：(i)通過使靶向劑與還原劑接觸來還原靶向劑以獲得粗制還原的靶向劑；(ii)將至少一個連接基團附接至還原的靶向劑以獲得包含靶向劑-接頭中間體的粗制組合物；(iii)將至少一種藥物化合物附接至靶向劑-接頭中間體的接頭以獲得包含綴合物化合物的粗制組合物；(iv)任選地將猝滅劑添加至粗制組合物；和(v)使用本公開的uf/df方法純化粗制組合物，其中第一交換介質包含至少一種有機溶劑，以獲得純化的綴合物化合物。在一些實施方案中，靶向劑是抗體。在一些實施方案中，靶向劑包含非抗體支架。
19、在一些實施方案中，靶向劑是抗體或抗原結合片段，并且純化的綴合物化合物是純化的抗體-藥物綴合物(adc)。在其他實施方案中，靶向劑包含非抗體支架，并且純化的綴合物化合物是純化的非adc綴合物。
20、在一些實施方案中，本發明的任何方法可以進一步包括將獲得的包含藥物綴合物的純化產物與藥學載劑或賦形劑配制以得到藥物組合物。