一種直接膽紅素檢測試劑的制作方法

一種直接膽紅素檢測試劑的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種直接膽紅素檢測試劑。本發明的檢測試劑包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2，其中試劑R1包括酒石酸緩沖液、鹽酸肼、表面活性劑和Proclin300，試劑R2包括磷酸緩沖液、偏釩酸鈉和Proclin300。本發明的直接膽紅素檢測試劑抗干擾能力強，準確度好，線性更高，穩定性強，可以消除干擾物質和間接膽紅素的干擾，適用于全自動生化分析儀，具有很高的臨床應用價值。
【專利說明】一種直接膽紅素檢測試劑

【技術領域】
[0001] 本發明屬于臨床體外檢測【技術領域】，具體涉及一種直接膽紅素檢測試劑。

【背景技術】
[0002] 直接膽紅素又稱結合膽紅素。未結合膽紅素在肝細胞內轉化，與葡糖醛酸結合形 成結合膽紅素，結合膽紅素用凡登伯定性試驗呈直接反應，故將這種膽紅素稱為直接膽紅 素。測定直接膽紅素主要用于鑒別黃疸的類型。引起直接膽紅素高的原因雖然很多，但最 常見的是由肝臟疾病引起的直接膽紅素高。因此，發現直接膽紅素高時，首先要考慮是不是 得了肝臟疾病，結合患者的病史、癥狀等進行綜合分析，選擇合適的檢查項目，確定引起直 接膽紅素高的原因，針對病因進行治療。
[0003] 目前測定血清膽紅素的方法主要有重氮法、酶法和化學氧化法，重氮法試劑不穩 定，必須由亞硝酸鈉和氨基磺酸臨時配制，且保存時間較短，而且重氮試劑與間接膽紅素和 直接膽紅素反應的特異性不佳，在一定條件下測定直接膽紅素時，有少量的間接膽紅素參 與反應，如果反應時間延長，參與的會更多，從而導致測定值不準，酶法價格較貴，而其 中的膽紅素氧化酶也易發生活性下降，影響測定的準確性。
[0004] 化學氧化法有釩酸鹽氧化法和亞硝酸鹽氧化法，易受間接膽紅素，如游離膽紅素、 S-膽紅素等的干擾，在臨床上容易出現假陽性，影響檢測結果的準確性，進而影響試劑在 市場上的應用。


【發明內容】

[0005] 為了解決上述技術問題，本發明提供了一種抗干擾性強、準確度高直接膽紅素檢 測試劑。
[0006] 本發明的技術方案如下： 一種直接膽紅素檢測試劑包括體積比為4:1的試劑Rl和試劑R2 ; 所述的，試劑Rl包括以下含量的組分： 酒石酸緩沖液 0. 05-0. Imol 鹽酸肼 5-IOmol 表面活性劑 I-IOmL Proclin300 I-IOmL 去離子水加至IL ; 所述的，試劑R2包括以下含量的組分： 憐酸緩沖液 50-IOOmmol 偏鑰;酸鈉 I-IOmmol Proclin300 I-IOmL 去離子水加至1L。
[0007] 所述的，酒石酸緩沖液的pH值為2. 0-4. 0,所述磷酸緩沖液的pH值為6. 0-7. 5。
[0008] 所述的，表面活性劑為十二烷基苯磺酸鈉、脂肪醇酯-35、三乙醇胺和甜菜堿按照 十二烷基苯磺酸鈉：脂肪醇酯-35 :三乙醇胺：甜菜堿=1:1:1:1的體積比組成的。
[0009] 優選的，試劑Rl包括以下含量的組分： 酒石酸緩沖液 0? 07mol 鹽酸肼 8mol 表面活性劑 5mL Proclin300 6mL 去離子水加至1L。
[0010] 優選的，試劑R2包括以下含量的組分： 磷酸緩沖液 75mmol 偏鑰;酸鈉 8mmol Proclin300 5mL 去離子水加至1L。
[0011] 反應原理：在pH=3附近，將偏釩酸鈉作用于樣本，在表面活性劑的催化下樣本中 的直接膽紅素被氧化成膽綠素，膽紅素所特有的黃色減少，在波長450nm處檢測其被釩酸 鹽氧化前后吸光度之差，其變化程度與樣本中的直接膽紅素(直接膽紅素）的含量成正比。
[0012] 酒石酸緩沖液：在pH值為2. 0-4. 0時，酒石酸對血清中的金屬離子有一定的絡合 作用，可去除金屬尚子的干擾。
[0013] 鹽酸肼：屏蔽試劑對間接膽紅素的氧化，提高檢測試劑的準確性。
[0014] 表面活性劑：通過乳化、洗滌等效果，去除溶血樣本的干擾物質，同時消除間接膽 紅素的影響。
[0015] Proclin300 :維持試劑穩定。
[0016] 磷酸鹽緩沖液：在pH值為6. 0-7. 5時，增強各組分的分散性，提高試劑的穩定性。
[0017] 偏釩酸鈉：氧化劑，在反應中作為主要的氧化物質。
[0018] 本發明一種直接膽紅素檢測試劑的使用方法，包括配制試劑Rl和試劑R2,將試劑 Rl和試劑R2按照體積比為4:1的比例放置到全自動生化分析儀對應的試劑位上，調整生化 分析儀的參數，在樣品盤的對應位置放置好蒸餾水、朗道校準品和樣本，測定直接膽紅素的 含量。
[0019] 本發明的積極效果：本發明的直接膽紅素檢測試劑抗干擾能力強，準確度好，線性 更高，穩定性強，可以消除干擾物質和間接膽紅素的干擾，基本能覆蓋所有的臨床標本，適 用于全自動生化分析儀，具有很高的臨床應用價值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020] 圖1為本發明實施例1制得的檢測試劑的相關性檢測結果； 圖2為本發明實施例2制得的檢測試劑的相關性檢測結果； 圖3為本發明實施例3制得的檢測試劑的相關性檢測結果； 圖4為市售檢測試劑的相關性檢測結果。

【具體實施方式】
[0021] 下面結合實施例對本發明作進一步的說明。
[0022] 實施例1 一種直接膽紅素檢測試劑包括體積比為4:1的試劑Rl和試劑R2 ; 試劑Rl包括以下含量的組分： 酒石酸緩沖液（pH=2. 0) 0. 05mol 鹽酸肼 IOmol 表面活性劑 IOmL Proclin300 ImL 去離子水加至IL ; 試劑R2包括以下含量的組分： 憐酸緩沖液（pH=7. 5) IOOmmol 偏鑰;酸鈉 Immol Proclin300 ImL 去離子水加至1L。
[0023] 表面活性劑為十二烷基苯磺酸鈉：脂肪醇酯-35 :三乙醇胺：甜菜堿=1:1:1:1的 體積比組成的。
[0024] 本實施例直接膽紅素檢測試劑的使用方法為：選用具有雙試劑功能的東芝40全 自動分析儀，配制試劑Rl和試劑R2,將試劑Rl和試劑R2按照4:1的體積比放置到對應的 試劑位上，在樣品盤的對應位置放置好蒸餾水、朗道校準品和樣本，先通過檢測蒸餾水和朗 道校準品獲得校準品檢測的吸光度變化，根據朗道校準品直接膽紅素試劑的靶值，得到試 劑的K因子，之后根據全自動生化分析儀測定的樣本的吸光度，就可以獲得樣本的直接膽 紅素濃度。具體操作如表1。
[0025] 表1直接膽紅素檢測試劑使用方法

【權利要求】
1. 一種直接膽紅素檢測試劑，其特征在于，它包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2 ; 所述試劑R1包括以下含量的組分：酒石酸緩沖液 0. 05-0. lmol鹽酸肼 5-10mol表面活性劑 l-10mLProclin300 1-lOmL去離子水加至1L ;所述試劑R2包括以下含量的組分：憐酸緩沖液 50-100mmol偏鑰;酸鈉 l-10mmolProclin300 1-lOmL去離子水加至1L。
2. 根據權利要求1所述的直接膽紅素檢測試劑，其特征在于，所述酒石酸緩沖液的pH 值為2. 0-4. 0,所述磷酸緩沖液的pH值為6. 0-7. 5。
3. 根據權利要求1所述的直接膽紅素檢測試劑，其特征在于，所述表面活性劑為十二 烷基苯磺酸鈉、脂肪醇酯-35、三乙醇胺和甜菜堿按照十二烷基苯磺酸鈉：脂肪醇酯-35 :三 乙醇胺：甜菜堿=1:1:1:1的體積比組成的。
4. 根據權利要求1所述的直接膽紅素檢測試劑，其特征在于，所述試劑R1包括以下含 量的組分： 酒石酸緩沖液 0? 07mol鹽酸肼 8mol表面活性劑 5mLProclin300 6mL去離子水加至1L。
5. 根據權利要求1所述的直接膽紅素檢測試劑，其特征在于，所述試劑R2包括以下含 量的組分： 磷酸緩沖液 75mmol偏鑰;酸鈉 8mmolProclin300 5mL去離子水加至1L。
【文檔編號】G01N21/78GK104406971SQ201410697750
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月28日 優先權日:2014年11月28日
【發明者】靖百謙, 趙峰玉, 甘宜梧, 譚柏清, 王綺, 謝清華 申請人:山東博科生物產業有限公司