本發明屬于基因工程領域，涉及一種肌胃糜爛素單鏈抗體。
背景技術：
1、肌胃糜爛素是一種在魚粉加熱干燥過程中產生的生物胺，化學式為c11h20n4o2，其分子量為240。當家禽等攝入含有肌胃糜爛素的飼料后，肌胃糜爛素就會通過與胃壁細胞上的組胺h2受體結合，進而增加細胞內camp濃度，促進胃酸的過量分泌，進而引發家禽的肌胃糜爛癥和黑色嘔吐病。其中，肌胃糜爛素增加細胞內camp濃度，刺激胃酸分泌，造成肌胃糜爛癥的能力分別比組胺高1000倍、10倍和300倍。當飼料中含有超過12%的變質魚粉時，家禽死亡率超過10%。因此，建立肌胃糜爛素的快速檢測方法對飼料安全和養殖動物的健康至關重要。
2、以抗原與抗體反應為基礎的免疫分析法因檢測速度快、反應成本低廉和實驗操作簡便等優點，目前已被廣泛應用于飼料安全、食品安全、疫病防控等領域的檢測。在免疫分析技術中，抗體扮演著核心角色，其性能直接關系到檢測方法的靈敏度和準確性。傳統的抗體通過動物免疫方式獲得，其不穩定、不易量產等缺點也限制了相關免疫分析技術的進一步發展。而具有易于表達和改造、生產工藝穩定且可控、分子量更小、穿透力更強的基因工程抗體已成為近年來抗體發展的新星。
3、但目前肌胃糜爛素免疫分析方法的研究主要集中在以單克隆抗體和多克隆抗體為主的傳統抗體上。至今尚未見有以基因工程抗體為主要識別元件的相關肌胃糜爛素免疫分析方法的建立。為了滿足實際檢測需求，有必要研發出更多能夠用于肌胃糜爛素的檢測的抗體，以豐富相關免疫分析方法在實際生產中的應用。
技術實現思路
1、為解決上述技術問題，本發明提出一種肌胃糜爛素單鏈抗體、試劑盒及其應用和免疫檢測方法。
2、本發明的技術方案是這樣實現的：
3、本發明第一個目的是提供一種肌胃糜爛素單鏈抗體，所述肌胃糜爛素單鏈抗體的重鏈可變區包含seq?id?no.1-3所示的氨基酸序列的vh9-3-cdr1-3；所述抗體的輕鏈可變區包含seq?id?no.4-6所示的氨基酸序列的vl9-3-cdr1-3。
4、進一步的，所述肌胃糜爛素單鏈抗體的氨基酸序列如seq?id?no.7所示。
5、本發明第二個目的是提供一種編碼上述的肌胃糜爛素單鏈抗體的核苷酸片段；優選的其核苷酸序列如seq?id?no.8所示。
6、本發明的第三個目的是提供一種包含上述核苷酸片段的重組表達載體。
7、本發明的第四個目的是提供一種包含上述重組表達載體的重組工程菌或重組表達細胞。
8、本發明的第五個目的是提供上述肌胃糜爛素單鏈抗體在制備檢測肌胃糜爛素的產品中的應用。
9、本發明的第六個目的是提供一種檢測肌胃糜爛素的試劑盒，進一步的，上述試劑盒包含肌胃糜爛素單鏈抗體。
10、本發明的第七個目的是提供一種檢測飼料、食品中肌胃糜爛素的方法，步驟為：以上述的肌胃糜爛素單鏈抗體為抗體，以肌胃糜爛素人工抗原h1-ova為包被原，進行酶聯免疫檢測。
11、優選的，上述肌胃糜爛素人工抗原h1-ova的結構式如下：
12、。
13、優選的，上述酶聯免疫為間接酶聯免疫檢測，具體為間接競爭酶聯免疫吸附檢測（icelisa）。
14、作為更優選地實施方案，本發明提供肌胃糜爛素的具體檢測方法：
15、s1.?制備包被含肌胃糜爛素人工抗原h1-ova的酶標板；
16、s2.?將肌胃糜爛素農藥標準品或待測樣品加入酶標板微孔中，然后加入所述單鏈抗體scfv?9-3；
17、s3.?加入酶標記的二抗，孵育；
18、s4.?加入顯色液，孵育；
19、s5.?加入終止液并測定；
20、s6.?以藥物標準濃度的log10值為橫坐標，以各標準品濃度的吸光值與零標準孔吸光值的比值為縱坐標，建立標準曲線，進而根據待測樣品的吸光值來計算待測樣品中的肌胃糜爛素農藥的含量。
21、本發明具有以下有益效果：
22、本發明在前期制備的抗肌胃糜爛素單克隆抗體6f4的基礎上，通過基因工程技術獲得了一種能夠特異性識別肌胃糜爛素的單鏈抗體scfv9-3，其氨基酸序列如seq?id?no.7所示。該單鏈抗體能夠特異性識別肌胃糜爛素農藥，icelisa檢測方法的ic50值為87.41?ng/ml，最低檢測限為13.60?ng/ml，線性范圍為27.02-282.77?ng/ml。進一步通過分子對接技術分析可知，該單鏈抗體與肌胃糜爛素之間主要通過氫鍵作用和疏水作用進行識別，共形成了7個氫鍵和2個疏水作用，結合的關鍵氨基酸位點為gln225、ile134、glu229、asp133和trp47。本發明提供的單鏈抗體具有分子量小、易于表達和改造的特點，為肌胃糜爛素的免疫檢測方法開發提供了新型基因工程抗體元件，可用于建立酶聯免疫分析方法或免疫層析檢測方法，在飼料安全監測和肌胃糜爛癥現場診斷中具有廣泛應用前景。
1.一種肌胃糜爛素單鏈抗體，其特征在于：所述肌胃糜爛素單鏈抗體的重鏈可變區包含seq?id?no.1-3所示的氨基酸序列的vh9-3-cdr1-3；所述抗體的輕鏈可變區包含seq?idno.4-6所示的氨基酸序列的vl9-3-cdr1-3。
2.根據權利要求1所述的肌胃糜爛素單鏈抗體，其特征在于：所述肌胃糜爛素單鏈抗體的氨基酸序列如seq?id?no.7所示。
3.編碼權利要求1或2所述的肌胃糜爛素單鏈抗體的核苷酸片段。
4.根據權利要求3所述的核苷酸片段，其核苷酸序列如seq?id?no.8所示。
5.包含權利要求4所述的核苷酸片段的重組表達載體。
6.含有權利要求5所述的重組表達載體的重組工程菌或重組表達細胞。
7.權利要求1或2所述的肌胃糜爛素單鏈抗體在制備檢測肌胃糜爛素的產品中的應用。
8.一種檢測肌胃糜爛素的試劑盒，其特征在于：包含權利要求1或2所述的肌胃糜爛素單鏈抗體。
9.一種檢測飼料、食品中肌胃糜爛素的方法，其特征在于，步驟為：以權利要求1或2所述的肌胃糜爛素單鏈抗體為抗體，以肌胃糜爛素人工抗原h1-ova為包被原，進行酶聯免疫檢測。
10.根據權利要求9所述的檢測飼料、食品中肌胃糜爛素的方法，其特征在于，所述肌胃糜爛素人工抗原h1-ova的結構式如下：