技術簡介：
本發明針對現有肌酸激酶同工酶（CK-MB）檢測試劑存在穩定性差、抗干擾能力弱、兒童及術后樣本易誤判等問題，通過優化試劑配方設計，采用納米粒子增強反應特異性，結合酶聯反應與免疫抑制法，實現對CK-MB的精準檢測。試劑R1含多種酶和緩沖體系，R2提供穩定劑與活性成分，提升檢測準確性與臨床適用性。
關鍵詞：肌酸激酶同工酶檢測,試劑穩定性,抗干擾能力
一種肌酸激酶同工酶檢測試劑的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種肌酸激酶同工酶檢測試劑。該試劑是由試劑R1和試劑R2，按照體積比4：1的比例組成的，其中試劑R1是由咪唑緩沖液、葡萄糖、納米粒子、N-乙酰半胱氨酸、乙二胺四乙酸鈉、腺苷二磷酸、輔酶Ⅰ、核糖核苷酸、丙酮酸脫羧酶、6-磷酸葡萄糖脫氫酶、己糖激酶、羊抗人CK-M多克隆抗體和海藻糖組成的，試劑R2是由咪唑緩沖液、磷酸肌酸、十二烷基苯磺酸鈉和防腐劑組成的。本發明的試劑是一種穩定、準確、抗干擾性強的肌酸激酶同工酶檢測試劑，具有很高的臨床應用價值。
【專利說明】-種肌酸激酶同工酶檢測試劑
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種涉及生物試劑，具體涉及一種檢測試劑，尤其涉及一種肌酸激酶 同工酶檢測試劑。
【背景技術】
[0002] 肌酸激酶（Creatine Kinase, CK) (ATP: Creatine N-phosphotransferase EC 2. 7. 3. 2)通常存在于動物的心臟、肌肉以及腦等組織的細胞漿和線粒體中，是一個與細胞 內能量運轉、肌肉收縮、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP)再生有直接關系的重要激酶1，2,它可逆 地催化肌酸與ATP之間的轉磷酰基反應。肌酸激酶有四種同功酶形式：肌肉型（MM)、腦型 (BB)、雜化型（MB)和線粒體型（MiMi)。MM型主要存在于各種肌肉細胞中，BB型主要存在 于腦細胞中，MB型主要存在于心肌細胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌線粒體中。肌 肉型肌酸激酶分子是由兩個相同的亞基組成的二聚體。根據目前已經測定的兔、人、雞、鼠 肌酸激酶的一級結構，M型亞基由387個氨基酸殘基組成，質量為43 KDa左右，分子內有8 個巰基，但無二硫鍵。大熊貓肌肉型肌酸激酶也是二聚體酶，每個亞基由376個氨基酸殘基 組成，分子量為42 KDa。
[0003] 血清CK-MB測定的最重要意義在于診斷急性心肌梗塞。急性心肌梗塞胸痛發作后 4-6小時，病人血清CK-MB先于總活性開始升高，12-36小時達峰值；多在72小時內恢復正 常。其最高值達對照組4. 9-22倍以上。如果梗塞后3-4天，CK-MB仍持續不降，表明心肌 梗塞仍在繼續進行，如果已下降的CK-MB再次升高則提示原梗塞部位病變擴展或有新的梗 塞病灶；如果胸痛患者在48小時內尚未出現CK-MB升高，或小于總活性的2,即可排除急性 心肌梗塞的診斷。臨床上常以CK-MB超過CK總活性的3 (離子交換柱層析法）或10 (免疫 抑制法）作為急性心肌梗塞的診斷依據。
[0004] 用CK-MB診斷急性心肌梗塞時必須注意無論是CK-MB的絕對活性或占總活性百分 率的界限值，均不適用于14歲以下的兒童，因為嬰幼兒和兒童的CK-MB均高于成人。各種 類型的心臟手術后有可能引起血清CK-MB活性增強，在并發術間或術后心肌梗塞時升高更 為顯著。
[0005] CK-MB由CK-M和CK-B亞單位組成。抗CK-M抗體完全抑制了 CK-MM (肌酸激酶的 主要活性部分）和CK-MB中的CK-M亞單位的活性。再檢測CK的活力為余下的CK-B的活 力，相當于一半CK-MB活力。所以將結果乘以2即為CK-MB的活力。CK-M活力檢測反應如 下：
【權利要求】
1. 一種肌酸激酶同工酶檢測試劑，其特征在于，該試劑由試劑R1和試劑R2,按照體積 比4 :1的比例組成的；所述試劑R1是由以下含量的成分組成的：咪唑緩沖液 50-100mmol葡萄糖 2〇-45mmo1納米粒子 20_40mmolN-乙酰半胱氨酸 20_30mmol乙二胺四乙酸鈉 l-8mmol腺苷二磷酸 l-10mmol輔酶 I 2-6_〇1核糖核苷酸 l〇-25mmol丙酮酸脫羧酶 0. 5-2KU6_磷酸葡萄糖脫氫酶 2-5KU己糖激酶 2-6KU羊抗人CK-M多克隆抗體 10-50mL海藻糖 l-l〇g去離子水加至1L ;所述試劑R2是由以下含量的成分組成的：咪唑緩沖液 50-100mmol磷酸肌酸 120-220mmol十二燒基苯磺酸鈉 5-20g防腐劑 l-l〇g去離子水加至1L。
2. 根據權利要求1所述的肌酸激酶檢測試劑，其特征在于，所述納米粒子為Y_Fe203納 米粒子，其粒徑為l〇_40nm。
3. 根據權利要求1所述的肌酸激酶同工酶檢測試劑，其特征在于，所述防腐劑為疊氮 化鈉或 Proclin300。
4. 根據權利要求1所述的肌酸激酶同工酶檢測試劑，其特征在于，所述咪唑緩沖液的 pH 值為 6. 0-7. 0。
5. 根據權利要求1所述的肌酸激酶同工酶檢測試劑，其特征在于，所述試劑R1是由以 下含量的成分組成的： 咪唑緩沖液 80mmol葡萄糖 32mmol納米粒子 30mmolN-乙酰半胱氨酸 25mmol乙二胺四乙酸鈉 5mmol腺苷二磷酸 5mmol輔酶I 4mmol核糖核苷酸 15mmol丙酮酸脫羧酶 1. 2KU6_磷酸葡萄糖脫氫酶 3KU己糖激酶 4KU羊抗人CK-M多克隆抗體 30mL海藻糖 5g去離子水加至1L。
6.根據權利要求1所述的肌酸激酶同工酶檢測試劑，其特征在于，所述試劑R2是由以 下含量的成分組成的： 咪唑緩沖液 70mmol磷酸肌酸 170mmol十二燒基苯磺酸鈉 l〇g防腐劑 6g去離子水加至1L。
【文檔編號】G01N33/70GK104374925SQ201410698140
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月28日 優先權日:2014年11月28日
【發明者】謝清華, 王進, 譚柏清, 甘宜梧, 王綺, 李靜, 包興艷 申請人:山東博科生物產業有限公司