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        一種L-蘇氨酸生產菌株及其構建方法與應用與流程

        文檔序號:45269537發布日期:2026-04-17 20:04閱讀:23來源:國知局
        技術特征:

        1.一種l-蘇氨酸生產菌株,其特征在于:是以棒狀桿菌屬菌株作為出發菌株的基礎上進行改造獲得的,所述改造包括:敲除出發菌株中的異亮氨酸轉運蛋白基因brnf;過表達來自大腸桿菌的l-蘇氨酸的外源外排蛋白基因rhtc。

        2.根據權利要求1所述的l-蘇氨酸生產菌株,其特征在于:所述改造通過在brnf位點整合包含來自大腸桿菌的l-蘇氨酸的外源外排蛋白基因rhtc的人工操縱子實現。

        3.根據權利要求1所述的l-蘇氨酸生產菌株,其特征在于:改造還包括敲除出發菌株中的賴氨酸轉運蛋白基因lyse;過表達來自大腸桿菌的蘇氨酸合成酶基因thrc、高絲氨酸激酶基因thrb、具有雙重功能的天冬氨酸激酶\高絲氨酸脫氫酶基因thra。

        4.根據權利要求3所述的l-蘇氨酸生產菌株,其特征在于:過表達來自大腸桿菌的蘇氨酸合成酶基因thrc、高絲氨酸激酶基因thrb、具有雙重功能的天冬氨酸激酶\高絲氨酸脫氫酶基因thra通過在lyse位點上整合包含來自大腸桿菌的蘇氨酸合成酶基因thrc、高絲氨酸激酶基因thrb、具有雙重功能的天冬氨酸激酶\高絲氨酸脫氫酶基因thra的人工操縱子實現。

        5.根據權利要求4所述的l-蘇氨酸生產菌株,其特征在于:所述包含來自大腸桿菌的蘇氨酸合成酶基因thrc、高絲氨酸激酶基因thrb、具有雙重功能的天冬氨酸激酶\高絲氨酸脫氫酶基因thra的人工操縱子的核苷酸序列如序列表seq?id?no.15所示。

        6.根據權利要求1-5任一項所述的l-蘇氨酸生產菌株,其特征在于:是進一步改造獲得的,所述進一步改造包括:過表達蘇氨酸合成酶基因thrc、攜帶突變位點的高絲氨酸激酶基因thrb(a20g)、攜帶突變位點的高絲氨酸脫氫酶基因hom(g378e)、天冬氨酸半醛脫氫酶基因asd、攜帶突變位點的天冬氨酸激酶基因lysc(t311i)和天冬氨酸轉氨酶基因aspb。

        7.一種l-蘇氨酸生產菌株的構建方法,其特征在于:以棒狀桿菌屬菌株作為出發菌株,敲除出發菌株中的異亮氨酸轉運蛋白基因brnf;過表達來自大腸桿菌的l-蘇氨酸的外源外排蛋白基因rhtc。

        8.根據權利要求7所述l-蘇氨酸生產菌株的構建方法,其特征在于:還包括敲除出發菌株中的賴氨酸轉運蛋白基因lyse;過表達來自大腸桿菌的蘇氨酸合成酶基因thrc、高絲氨酸激酶基因thrb、具有雙重功能的天冬氨酸激酶\高絲氨酸脫氫酶基因thra;過表達蘇氨酸合成酶基因thrc、攜帶突變位點的高絲氨酸激酶基因thrb(a20g)、攜帶突變位點的高絲氨酸脫氫酶基因hom(g378e)、天冬氨酸半醛脫氫酶基因asd、攜帶突變位點的天冬氨酸激酶基因lysc(t311i)和天冬氨酸轉氨酶基因aspb。

        9.根據權利要求7或8所述l-蘇氨酸生產菌株的構建方法,其特征在于:具體步驟如下:

        10.權利要求1-6任一項所述l-蘇氨酸生產菌株在發酵生產l-蘇氨酸中的應用。


        技術總結
        本發明提供了一種L?蘇氨酸生產菌株及其構建方法與應用,利用同源重組基因編輯技術,敲除賴氨酸轉運蛋白基因lysE和異亮氨酸轉運蛋白基因brnF,首先過表達蘇氨酸抑制的lysC(T311I)、hom(G378I)和thrB(A20G);過表達thrC和aspB;異源引入且多拷貝大腸桿菌來源的thrA?thrB?thrC基因和外排蛋白rhtC基因,其中thrA?thrB?thrC是通過人工操縱子Psod?thrA?thrB?thrC來進行同步多拷貝的;所構建的菌株不含質粒,無缺陷,無需誘導,遺傳穩定性好、以葡萄糖為底物從頭高效合成L?蘇氨酸,發酵產率高。

        技術研發人員:黃冠,萬同信,孫磊,王晶,王雨方,徐慶陽
        受保護的技術使用者:天津禾潤生物技術有限公司
        技術研發日:
        技術公布日:2026/4/16
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