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        一種高產L-色氨酸的基因工程菌株及其構建方法和應用與流程

        文檔序號:45273347發布日期:2026-04-17 20:16閱讀:12來源:國知局
        技術特征:

        1.一種高產l-色氨酸的基因工程菌株,其特征在于,所述基因工程菌株表達突變型flhd蛋白和/或突變型gabd蛋白;

        2.根據權利要求1所述的高產l-色氨酸的基因工程菌株,其特征在于,所述突變型flhd蛋白的氨基酸序列包括如seq?id?no.3所示的序列;

        3.根據權利要求1或2所述的高產l-色氨酸的基因工程菌株,其特征在于,所述基因工程菌株包括重組大腸桿菌工程菌株。

        4.一種權利要求1-3中任一項所述的高產l-色氨酸的基因工程菌株的構建方法,其特征在于,所述構建方法包括:利用同源重組技術,將突變型flhd基因和/或突變型gabd基因整合至宿主微生物的基因組中,替換其相應的野生型基因,即得所述高產l-色氨酸的基因工程菌株。

        5.根據權利要求4所述的構建方法,其特征在于,所述同源重組技術包括:在宿主微生物中表達λ-red重組酶,將兩端帶有與基因組目標位點同源臂的線性dna片段電轉化進入所述宿主微生物,所述線性dna片段含有突變型flhd基因和/或突變型gabd基因,通過抗性篩選和基因型驗證獲得正確的重組基因工程菌株。

        6.根據權利要求4或5所述的構建方法,其特征在于,所述線性dna片段的制備方法包括:以含有突變型flhd基因和/或突變型gabd基因的質粒為模板,使用如seq?id?no.5-seqid?no.8和/或seq?id?no.9-seq?id?no.12所示的引物進行pcr擴增獲得;所述突變型flhd基因的核酸序列包括如seq?id?no.1所示的序列,所述突變型gabd基因的核酸序列包括如seq?id?no.2所示的序列。

        7.根據權利要求4-6中任一項所述的構建方法,其特征在于,所述宿主微生物包括大腸桿菌。

        8.權利要求1-3中任一項所述的高產l-色氨酸的基因工程菌株在生產l-色氨酸中的應用。

        9.一種生產l-色氨酸的方法,其特征在于,所述方法包括以下:將權利要求1-3中任一項所述的高產l-色氨酸的基因工程菌株接種至種子培養基中進行培養,獲得種子液,將種子液接種至發酵培養基中進行發酵培養,從發酵培養結束后的發酵液中回收l-色氨酸。

        10.根據權利要求9所述的方法,其特征在于,所述發酵培養的溫度為35-38℃,攪拌轉速為150-250?rpm,培養時間為20-28小時。


        技術總結
        本發明公開了一種高產L?色氨酸的基因工程菌株及其構建方法和應用。所述基因工程菌株表達突變型FlhD蛋白和/或突變型GabD蛋白;所述突變型FlhD蛋白第84位氨基酸為苯丙氨酸;所述突變型GabD蛋白第130位氨基酸為脯氨酸。本發明通過引入flhD突變基因,同時結合gabD突變基因對大腸桿菌進行改造,共同提升細胞內谷氨酸這一前體物質的含量,顯著提升了L?色氨酸的產量,為L?色氨酸的工業化生產提供了新的思路。

        技術研發人員:李學朋,王奎智,王中凱,王均成,房寧,趙杰
        受保護的技術使用者:新疆阜豐生物科技有限公司
        技術研發日:
        技術公布日:2026/4/16
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