本發明涉及免疫學和分子生物學領域，尤其涉及靶向腺病毒dbp蛋白的單克隆抗體及其用途。
背景技術：
1、人腺病毒（human?adenovirus，hadv）在分類學上屬腺病毒科?（adenoviridae）、哺乳動物腺病毒屬（mastadenovirus），包括7個種（species），人腺病毒a（hadv-a）~人腺病毒g（hadv-g）。截至2024年3月，已經鑒定出?116個型別（type）的hadv。人腺病毒是一種無包膜的雙鏈dna病毒，基因組長度約為35kb，病毒呈球形，負染電鏡下可見病毒顆粒直徑約為80nm。病毒顆粒包括蛋白質衣殼和含有dna的核心，衣殼為典型的二十面體立體對稱型，由252個殼粒組成，含有240個六鄰體（hexon）、12個五鄰體（penton）。人類腺病毒基因組包含五個早期轉錄單位（e1a、e1b、e2、e3和e4）、四個中間轉錄單位以及一個晚期轉錄單位。晚期轉錄單位表達衣殼蛋白、小衣殼蛋白及核心蛋白，是病毒重要的抗原成分。非結構蛋白主要為前末端蛋白（preterminal?protein，ptp），病毒dna聚合酶（viral?dna?polymerase，ad-pol）和病毒dna結合蛋白（viral?single-stranded?dna-binding?protein，dbp）和其它早期蛋白，在病毒的生命周期的各個階段中發揮重要作用。
2、人腺病毒可以引起多種人類疾病，由于不同型別的腺病毒組織嗜性不同，可導致呼吸系統、消化系統和泌尿/生殖系統等多部位的感染及相關疾病。該病毒具有較強的傳染性，我國人腺病毒引起的呼吸道感染暴發疫情時有發生，部分地區還出現了聚集性危重癥病例。另外，人腺病毒可能發生基因重組，產生致病性更高、傳染性更強的新型毒株。病毒的結構蛋白具有免疫原性，并有效激發宿主免疫反應。腺病毒非結構蛋白dbp由早期基因e2a編碼，研究表明，dbp在病毒感染早期大量表達，并表現為較強的免疫原性，能夠在感染早期誘導較強的抗體反應，且在不同型別的腺病毒中表現出較強的保守性（參見guo?l,?wu?c,zhou?h,?et?al.?identification?of?a?nonstructural?dna-binding?protein?(dbp)?asan?antigen?with?diagnostic?potential?for?human?adenovirus.?plos?one.?2013;8(3):e56708.），因而具備作為診斷標志物的潛在應用價值。
3、雜交瘤細胞由能夠產生特異性抗體的b細胞與可在體外無限增殖的骨髓瘤細胞融合而成，兼具持續分泌單克隆抗體的能力和長期傳代的特性。單克隆抗體因其高度特異性、高度均一性、強靶向性、低毒性及輕微副作用，已廣泛應用于多種疾病的診斷與治療。因此，針對人腺病毒dbp的特異性單克隆抗體，可用于病毒感染檢測、病原學及免疫學等相關試劑的開發，具有重要的應用價值。
技術實現思路
1、有鑒于此，本發明的目的是提供一種針對人腺病毒dbp的特異性單克隆抗體，其可用于高效檢測多種型別的hadv?dbp。
2、本發明的第一方面提供了一種靶向腺病毒dbp蛋白的單克隆抗體，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含重鏈互補決定區hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述輕鏈可變區包含輕鏈互補決定區lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中：
3、所述hcdr1的氨基酸序列如seq?id?no:?1所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seq?idno:?2所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seq?id?no:?3所示；所述lcdr1的氨基酸序列如seqid?no:?4所示，所述lcdr2的氨基酸序列如seq?id?no:?5所示，所述lcdr3的氨基酸序列如seq?id?no:?6所示。
4、在本發明的優選的實施方案中，所述重鏈可變區還包含重鏈框架區hfr1、hfr2、hfr3和hfr4，所述輕鏈可變區還包含輕鏈框架區lfr1、lfr2、lfr3和lfr4，其中：
5、所述hfr1的氨基酸序列如seq?id?no:?7所示，所述hfr2的氨基酸序列如seq?idno:?8所示，所述hfr3的氨基酸序列如seq?id?no:?9所示，所述hfr4的氨基酸序列如seq?idno:?10所示；所述lfr1的氨基酸序列如seq?id?no:?11所示，所述lfr2的氨基酸序列如seqid?no:?12所示，所述lfr3的氨基酸序列如seq?id?no:?13所示，所述lfr4的氨基酸序列如seq?id?no:?14所示。
6、在本發明的優選的實施方案中，所述重鏈可變區的氨基酸序列如seq?id?no:?15所示，所述輕鏈可變區的氨基酸序列如seq?id?no:?16所示。
7、在本發明的優選的實施方案中，所述單克隆抗體為重組小鼠抗體。
8、本發明的第二方面提供了一種核酸分子，其包含編碼上述單克隆抗體的核苷酸序列。
9、在本發明的優選的實施方案中，所述核酸分子包含編碼所述重鏈可變區的核苷酸序列，其如seq?id?no:?17所示；和編碼所述輕鏈可變區的核苷酸序列，其如seq?id?no:?18所示。
10、本發明的第三方面提供了一種載體，其包含上述核酸分子。
11、本發明的第四方面提供了一種細胞，其包含上述核酸分子或上述載體。
12、本發明的第五方面提供了一種用于檢測人腺病毒的試劑盒，其包含上述單克隆抗體。
13、在本發明的一種優選的實施方案中，所述試劑盒為western?blot試劑盒，其還包含：熒光標記偶聯的第二抗體、硝酸纖維素膜、封閉液、洗滌緩沖液。
14、在本發明的更優選的實施方案中，所述熒光標記偶聯的第二抗體為irdye?800cw偶聯的山羊抗小鼠igg（h+l）抗體；所述封閉液為5%脫脂牛奶/pbs溶液；所述洗滌緩沖液為pbst溶液。
15、在本發明的另一種優選的實施方案中，所述試劑盒為免疫熒光檢測試劑盒，其還包含：熒光標記偶聯的第二抗體、細胞固定液、封閉液、細胞通透劑、洗滌緩沖液。
16、在本發明的更優選的實施方案中，所述熒光標記偶聯的第二抗體為alexa?488偶聯的山羊抗小鼠igg（h+l）抗體；所述細胞固定液為4%多聚甲醛溶液；所述封閉液為5%?bsa/pbs溶液；所述細胞通透劑為triton-x100；所述洗滌緩沖液為pbs溶液。
17、本發明的第六方面提供了一種制備上述單克隆抗體的方法，包括培養上述細胞并從中分離和回收所述抗體。
18、本發明的第七方面提供了上述單克隆抗體、上述核酸分子、上述載體或上述細胞用于制備檢測樣品中人腺病毒的試劑的用途。
19、本發明的第八方面提供了一種檢測樣品中人腺病毒的方法，其包括：首先將樣品與上述單克隆抗體結合，再加入經過標記的第二抗體，通過檢測反應信號獲得樣品中人腺病毒的檢測結果。
20、在本發明的優選的實施方案中，所述人腺病毒選自hadv-a12、hadv-b3、hadv-c5、hadv-d8、hadv-e4、hadv-f41、hadv-b7、hadv-b11、hadv-b14、hadv-b21。
21、在本發明的優選的實施方案中，所述檢測反應信號的方法為western?blot或免疫熒光檢測。